Aardappeldextrose-agarbasis, bereiding en gebruik

3725
Sherman Hoover

De aardappeldextrose-agar Het is een solide, niet-selectief voedingsmedium. Bacteriële en schimmelsoorten kunnen erin groeien, maar het gebruik ervan is vooral geïndiceerd voor het isoleren van draadschimmels en gisten. Het is ook bekend als PDA-medium voor de Engelse uitdrukking Potato Dextrose Agar.

Het is met name nuttig voor het isoleren van fytopathogene schimmels, dat wil zeggen schimmels die planten aantasten. Om de monsters van geïnfecteerde groenten te zaaien, kunnen andere middelen zoals Sabouraud-agar of malta-agar worden gebruikt, maar voor routinematig gebruik heeft aardappeldextrose-agar de voorkeur vanwege het verkrijgen van een grotere sporulatie..

Aspergillus niger en Sinemas op respectievelijk aardappeldextrose-agar. Bron: Alextrevelian 006 op Engelse Wikipedia [Public domain] / Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Het wordt ook gebruikt voor het tellen van schimmelkolonies in monsters van cosmetica, farmaceutische producten en sommige zuivelproducten. Evenzo is het geschikt voor het zaaien van monsters van huidafkrabsels op zoek naar dermatofyten, die zeer goed groeien in dit medium en hun karakteristieke pigmenten ontwikkelen..

Aardappeldextrosemedium is een heel eenvoudig en gemakkelijk medium om in het laboratorium te bereiden. Bevat, zoals de naam al aangeeft, een infusie van aardappel, dextrose en agar-agar. Bovendien kunnen remmende stoffen worden toegevoegd om bacteriegroei te voorkomen en de selectiviteit voor schimmelsoorten te verhogen..

Artikel index

  • 1 Grondgedachte
  • 2 Voorbereiding
    • 2.1 -Huisgemaakte (niet-commerciële) bereiding van aardappeldextrose-agar
    • 2.2-Commerciële bereiding van aardappeldextrose-agar
  • 3 toepassingen
    • 3.1 Proces voor het zaaien van plantmonsters op aardappeldextrose-agar
    • 3.2 Proces voor het zaaien van huid-, haar- of nagelschaalmonsters op aardappeldextrose-agar
    • 3.3 Identificatieprocedure
    • 3.4 Kolonietelling
    • 3.5 Onderhoud van schimmelstammen
  • 4 Kwaliteitscontrole
  • 5 referenties

Basis

Aardappeldextrose-agar is een kweekmedium dat voorziet in de voedingselementen die nodig zijn voor de ontwikkeling van draadschimmels en gisten..

De combinatie van de infusie van aardappel met glucose vormt de perfecte energiebron voor een bevredigende groei van schimmels. Terwijl de agar degene is die de consistentie aan het medium geeft.

Het medium zelf remt de groei van bacteriën niet, daarom is het een niet-selectief medium. Om het selectief te maken, heeft het de toevoeging van remmende stoffen nodig, zoals wijnsteenzuur of antibiotica..

Voorbereiding

-Zelfgemaakte (niet-commerciële) bereiding van aardappeldextrose-agar

Petri schalen

Het is als volgt opgesteld:

In de eerste plaats worden de aardappelen heel goed gewassen, waardoor de grond die ze bezitten wordt verwijderd. Ze worden met alles en de schaal in dunne plakjes gesneden. 200 g aardappelen worden gewogen en een half uur gekookt in een liter gedestilleerd water.

Aan het einde van de tijd, filter of zeef alle bereiding door een kaasdoek.

De verkregen vloeistof wordt aangevuld met gedestilleerd water tot een liter. Voeg 20 g agar-agar en 20 g dextrose toe aan de infusie, meng goed en autoclaaf bij 121 ° C, bij 15 pond druk gedurende 15 minuten..

Laat afkoelen tot 50 ° C en serveer in steriele petrischalen. De voorbereide borden worden in de koelkast bewaard..

Wiggen

Aardappeldextrose-agarwiggen kunnen ook worden bereid..

In dit geval wordt vóór sterilisatie in de autoclaaf 12 tot 15 ml van het medium in buisjes gedaan, later worden ze geautoclaveerd en bij het verlaten op speciale steunen liggen totdat het stolt. Bewaar in de koelkast.

Het medium blijft op een pH van 5,6 ± 0,2, maar sommige laboratoria voegen 10% wijnsteenzuur toe om de pH te verlagen tot 3,1 ± 0,1 om bacteriegroei te remmen..

In dezelfde zin geven andere laboratoria er de voorkeur aan om antibiotica toe te voegen om het selectief te maken voor de kweek van schimmels en om bacteriële ontwikkeling te voorkomen..

-Commerciële bereiding van aardappeldextrose-agar

Weeg 39 g van het in de handel verkrijgbare gedehydrateerde medium af en los op in een liter gedestilleerd water. Laat 5 minuten staan.

Het mengsel wordt onder veelvuldig roeren verwarmd tot het volledig is opgelost. Vervolgens wordt het gedurende 15 minuten gesteriliseerd in een autoclaaf bij 121 ° C..

Borden of wiggen kunnen worden voorbereid. Ga verder zoals hierboven beschreven.

De pH is 5,6 ± 0,2. Als de pH van 3,1 gewenst is, moet 14 ml steriel 20% wijnsteenzuur worden toegevoegd voordat het op de borden wordt geserveerd..

Het ruwe medium is beige en het bereide medium is licht amberkleurig met een licht troebel of opaalachtig uiterlijk..

Toepassingen

Proces voor het zaaien van plantmonsters op aardappeldextrose-agar

-Voor gevlekte bladeren

De bladeren worden in stukjes gesneden.

Plaats in een glas van 50 cc met 50% alcohol de stukjes van de bladeren (gekleurde en gezonde stukjes) om het oppervlak gedurende 20 tot 30 seconden te desinfecteren. Gooi de alcohol weg en voeg 20% ​​natriumhypochloriet toe gedurende 40 tot 50 seconden als het dunne bladeren zijn en verleng de tijd tot 80 seconden als het schors en houtblokken zijn.

Gooi het natriumhypochloriet weg en neem de gedesinfecteerde stukken met een steriel pincet en plaats ze op het oppervlak van het medium (maximaal 10 stuks). Datum en incubeer bij 20-30 ° C.

-Voor fruit en knollen

Als de vrucht vlezig is, open dan de door de schimmel aangetaste vrucht en neem met een steriele scalpel stukken, zowel van de zieke als gezonde delen, en leg ze op het oppervlak van de agar.

Als de vrucht een citrusvrucht is, zoals een citroen of een sinaasappel, moet deze worden geopend en de zaden worden gezaaid.

Wanneer het oppervlak van de vrucht is aangetast en er sporen worden waargenomen, is het ideaal om de raspmethode op de plaat te gebruiken; Dit bestaat uit het aanraken van de sporen met een gesteriliseerde en gekoelde "L" -vormige spatel, en vervolgens 2 tot 3 keer een zigzag zaaien op de agar..

-Voor granen

Ze worden gedesinfecteerd zoals beschreven in de bladeren en later op de agar geplaatst.

-Voor takken en stengels

De schors wordt geschraapt en later worden stukjes van het gezonde en zieke deel genomen en direct op de agar gezaaid.

De geënte platen worden 72 uur aëroob bij 20-30 ° C geïncubeerd.

Proces voor het zaaien van huid-, haar- of nagelschaalmonsters op aardappeldextroseagar

De bemonstering moet worden gedaan met een scalpelmes nr. 11, om aangetast haar, huidschilfers of nagels te knippen op zoek naar dermatofyten. Voordat het monster wordt genomen, moet de ruimte worden gedesinfecteerd met alcohol 70%..

-Huidmonster

Bij schilferige laesies moet de rand van de laesie worden geschraapt, omdat de kans daar groter is dat de schimmel daar wordt aangetroffen.

Bij exsudatieve laesies wordt het monster genomen met een droog of nat wattenstaafje. Direct zaaien op aardappeldextrose-agar of Sabouraud-agar. Vermijd transportmiddelen.

Een andere methode van bemonstering is door middel van de tapijtvierkanttechniek van Mariat en Adan Campos. In dit geval wordt het aangetaste gebied 5 keer ingewreven met een stuk steriele wol voor latere teelt..

Het monster kan rechtstreeks in het kweekmedium worden geplaatst.

-Haarmonster

Afhankelijk van de pathologie kan het aangetaste deel worden afgesneden of ontworteld. Plaats het monster in het kweekmedium.

-Nagelmonster

Een specifiek deel van de aangetaste nagel kan worden geschraapt of geknipt. Het hangt af van het soort letsel.

Snijd het monster voor het zaaien in stukjes van 1 mm om de kans op contact van de schimmel met het kweekmedium te vergroten..

Identificatieprocedure

De kolonies die in de plaat worden verkregen, worden geïsoleerd in buisjes met aardappeldextrose-agar om de macroscopische studie van de kolonies uit te voeren (uiterlijk, kleur, consistentie, ontwikkelingsgraad.

De microscopische studie (observatie van structuren en hun formaties) kan worden gedaan door microculturen of directe observatie onder de microscoop tussen lamina en lamella..

Kolonie tellen

Dit medium kan ook worden gebruikt om de schimmel- en gistbelasting te bepalen die aanwezig is in monsters van planten, voedingsmiddelen, cosmetica of geneesmiddelen. Hiervoor wordt aardappeldextroseagar aangevuld met antibiotica gebruikt, zoals: (chlooramfenicol, chloortetracycline of beide).

Giet 1 ml van het monster - bij voorkeur verdund - in een steriele en lege petrischaal, smelt vervolgens een prop aardappeldextrose-agar en laat afkoelen tot 45 ° C. Giet op de petrischaal en draai tot gehomogeniseerd. Laat staan ​​tot het stevig is.

Incubeer aëroob bij 20-25 ° C (schimmels) of 30-32 ° C (gisten) gedurende 5 tot 7 dagen of langer, afhankelijk van het gezochte type schimmel en het type monster. Twee platen kunnen worden gebruikt om in beide temperatuurbereiken te incuberen.

Tellen van schimmelkolonies in een voedselmonster. Aardappeldextrose-agar aangevuld met antibiotica. Bron: Pxhere.com foto / 777267

Onderhoud van schimmelstammen

Aardappeldextrose-agar kan worden gebruikt om levensvatbare schimmelstammen gedurende meerdere jaren te behouden.

Om dit te doen, wordt de schimmel gekweekt in partjes aardappeldextrose-agar en zodra de schimmel is gegroeid, wordt deze bedekt met minerale olie. De olie moet 45 minuten in een autoclaaf worden gesteriliseerd en heeft een viscositeit van ongeveer 300 tot 330 Saybolt. De olie moet 1 tot 2 cm boven de punt van de afschuining zijn.

QA

Van elke bereide batch moeten 1 of 2 platen worden genomen en 48 uur bij 25 ° C of 96 uur bij 20 ° C worden geïncubeerd. Een goede beheersing van de onvruchtbaarheid is er een waarbij de ontwikkeling van een kolonie niet wordt waargenomen..

Bekende of gecertificeerde controlestammen zoals:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. In alle gevallen wordt een goede groei verwacht.

Referenties

  1. Britannia Laboratories. Glucose-agar-aardappel. 2015 Beschikbaar op: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories. Aardappel Dextrose-agar. Beschikbaar op: foodsafety.neogen.com
  3. Insumolab-laboratorium. Aardappeldextrose-agar. Verkrijgbaar bij: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.
  5. Casas-Rincón G. Algemene mycologie. 1994. 2e editie Centrale Universiteit van Venezuela, bibliotheekuitgaven. Venezuela Caracas.
  6. Aceituno M. Evaluatie van de microbiologische kwaliteit in oogschaduw, compact poedertype van een nationaal productielaboratorium, volgens de referentiemethode Pharmacopea Usp 2005. Proefschrift om in aanmerking te komen voor de titel van farmaceutisch chemicus. Universiteit van San Carlos van Guatemala.
  7. Cuétara M. Verwerking van oppervlaktemonsters. Ibero-American Journal of Mycology. 2007; pp. 1-12

Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.