Thayer Martin agar foundation, voorbereiding en gebruik

3929
Abraham McLaughlin

De Thayer Martin-agar is een zeer voedzaam en selectief vast medium voor de isolatie van Neisseria meningitidis en Neisseria gonorrhoeae; beide bekend als pathogene of klinisch belangrijke Neisseria's.

Een van de belangrijkste bijzondere kenmerken van Thayer Martin Agar is het hoge gehalte aan voedingssupplementen. Deze eigenschap is essentieel, omdat Neisseria's vanuit voedingsoogpunt zeer veeleisende micro-organismen zijn en daarom niet in gewone media groeien..

Zakelijk medium Thayer Martin / Agar Thayer Martin. Bronafbeelding 1: genomen door de auteur MSc. Marielsa Gil, afbeelding 2. Pixinio.com-bacteriën gekoloniseerd, gemodificeerd, Thayer, Martin, agar.

Aan de andere kant, aangezien deze micro-organismen normaal gesproken in niet-steriele gebieden worden aangetroffen, is het noodzakelijk om remmers toe te voegen die de groei van de begeleidende flora voorkomen, zonder de ontwikkeling van het geslacht Neisseria te beïnvloeden..

Deze agar is samengesteld uit GC-basisagar, hemoglobine, aanvullende voedingssupplementen en een complex van remmende stoffen (antibiotica en antischimmelmiddelen). De commerciële huizen verkopen elk van de supplementen afzonderlijk.

Het monster dat in dit medium wordt gezaaid, is afhankelijk van het micro-organisme dat wordt gezocht. Om zo te Neisseria gonorrhoeae ideale monsters zijn vaginale en urethrale afscheidingen. Terwijl voor Neisseria meningitidis de meest gebruikte monsters zijn liquor, keelholte en nasofaryngeale exsudaten.

Artikel index

  • 1 Grondgedachte
    • 1.1 GC-basisagar
    • 1.2 Hemoglobine
    • 1.3 Verrijkingssupplement
    • 1.4 Remmers
  • 2 Voorbereiding
    • 2.1 Originele Thayer Martin-agar
    • 2.2 Gemodificeerde Thayer Martin-agar
  • 3 Gebruik
  • 4 Kwaliteitscontrole
  • 5 Beperkingen
  • 6 referenties

Basis

Neisseria's zijn micro-organismen die als irritant worden geclassificeerd en daarom is hun isolatie moeilijk. Om deze reden is Thayer Martín een complex medium en elk van zijn componenten vervult een functie die hieronder wordt uitgelegd:

GC-basisagar

GC-agar bevat proteose pepton, maïszetmeel, natriumchloride, dikaliumfosfaat, monokaliumfosfaat en agar-agar. De componenten bieden de basisvoedingsstoffen voor microbiële ontwikkeling, neutraliseren giftige vetzuren, helpen het osmotische evenwicht te behouden, bepalen de pH en zorgen voor een vaste consistentie van het medium..

Hemoglobine

Hemoglobine levert factoren V en X (respectievelijk nicotinamide-adenine-dinucleotide NAD en hemine). Om deze reden groeien ook Haemophilus-soorten in dit medium. Hemoglobine kan commercieel worden verkregen in gedehydrateerde vorm of vers gedefibrineerd runderbloed kan aan het medium worden toegevoegd..

Verrijkingssupplement

Aan de andere kant moet ook een verrijkingssupplement worden toegevoegd aan het Thayer-Martin-medium, omdat de voedingsstoffen in de basisagar niet voldoende zijn voor de vereisten van het geslacht Neisseria..

Het meest gebruikte verrijkingssupplement heet isovitalex. Het bevat glutamine, adenine, NAD, cocarboxylase, guanine, ijzernitraat, p-aminobenzoëzuur, vitamine B12, thiamine en glucose. Al deze verbindingen zijn nodig voor de goede ontwikkeling van pathogene Neisseria's.

Remmers

Omdat het een zeer voedzaam medium is, moeten remmers worden gebruikt die de groei van micro-organismen van de gebruikelijke flora van het gebied voorkomen en zo de isolatie van het geslacht Neisseria bevorderen..

Het remmercomplex is samengesteld uit vancomycine, colistine en nystatine. Vancomycine remt de groei van Gram-positieve bacteriën, colistine voorkomt de groei van Gram-negatieve bacteriën zoals Pseudomonas en sommige saprofytische Neisseria's, en nystatine werkt op gist als Candida albicans.

Thayer Martin Agar werd later echter gewijzigd; de veranderingen bestonden uit de toevoeging van trimethoprim, de toename van de hoeveelheid agar en de toevoeging van extra glucose. Deze veranderingen hebben het herstel van de soort aanzienlijk verbeterd Neisseria gonorrhoeae.

Opgemerkt moet worden dat trimethoprim de groei van het geslacht Proteus en de daaruit voortvloeiende zwermvorming remt. In die zin zijn antibiotica die welke het selectieve karakter geven aan het Thayer Martin-medium.

Voorbereiding

Originele Thayer Martin-agar

-GC-agar

Weeg 8,2 g gedehydrateerd GC-medium af en suspendeer in 100 ml. Meng en kook gedurende 1 minuut onder regelmatig roeren om volledig op te lossen. Steriliseer het mengsel gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C.

-2% hemoglobine

Suspendeer 2 g gedehydrateerde hemoglobine in 2 of 3 ml heet gedestilleerd water tot een uniform mengsel is gevormd. Voeg beetje bij beetje meer water toe om een ​​volume van 100 ml te krijgen. De suspensie moet homogeen zijn alvorens te steriliseren.

Steriliseer gedurende 15 minuten in een autoclaaf.

-Verrijkingssupplement

Reconstitueer de commerciële injectieflacon met het verdunningsmiddel dat door hetzelfde commerciële bedrijf wordt geleverd. Meng goed. De te gebruiken hoeveelheid verdunningsmiddel wordt vermeld in de instructies van de kit..

-V.C.N-remmersupplement (vancomycine, colistine, nystatine)

Reconstitueer de injectieflacon met het verdunningsmiddel dat door het commerciële bedrijf wordt geleverd. Meng goed. De te gebruiken hoeveelheid verdunningsmiddel wordt vermeld in de instructies van de kit..

-Bereid

Ga voor elke 100 ml GC-agar als volgt te werk:

Laat de GC-agar de autoclaaf afkoelen tot een temperatuur van ongeveer 50 ° C en voeg 2 ml van de bereide hemoglobine-oplossing, 2 ml van het verrijkingssupplement (isobitalex of britalex) en 2 ml van het remmingssupplement toe. Mix en serveer in steriele petrischalen..

Laat stollen en bewaar in de koelkast tot gebruik.

De kleur van het voorbereide medium is kersenrood. De uiteindelijke pH van het medium is 7,2 ± 0,2

Gemodificeerde Thayer Martin-agar

Weeg 8,2 g gedehydrateerd GC-medium af en suspendeer in 100 ml. Voeg 1 g agar-agar toe en voeg 0,3 g glucose toe. Meng en kook gedurende 1 minuut onder regelmatig roeren om volledig op te lossen. Steriliseer het mengsel gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C.

Bereid het hemoglobine- en verrijkingssupplement voor zoals hierboven beschreven.

Het gebruikte remmingssupplement is V.C.N.T (vancomycine, colistine, nystatine, trimethoprim).

-Bereid

Ga verder zoals beschreven voor de originele Thayer Martin-agar.

Gebruik

Thayer Martin Agar moet de gelegenheid krijgen om op te warmen voordat de exemplaren worden gestreept. Veelgebruikte monsters zijn faryngeale uitstrijkjes, neusuitstrijkjes, vaginale, urethrale en / of rectale afscheiding en liquor..

Gebruik verse monsters en maak sterke inocula op de agar. Monsters worden direct gezaaid door materiaalafvoer en vervolgens uitputtingsstrepen op het oppervlak.

De platen worden 24 tot 48 uur bij 35-37 ° C geïncubeerd in een micro-aerofiele pot (5% COtwee​Aan het einde van de incubatietijd worden de platen onderzocht op kleine kolonies, grijs van kleur en soms mucoïd van uiterlijk..

Voer gram- en bevestigende biochemische tests uit op verdachte kolonies.

QA

De volgende microbiële stammen kunnen worden gebruikt om kwaliteitscontrole uit te voeren op Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 en Neisseria meningitidis ATCC 13090; bij beide stammen wordt een bevredigende ontwikkeling verwacht.

De volgende soorten moeten ook worden opgenomen: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 en Candida albicans ATCC 10231. Bij alle wordt een totale of gedeeltelijke remming verwacht in dit medium..

Beperkingen

-Houd er rekening mee dat bacteriën die resistent zijn tegen de gebruikte remmers in het medium kunnen groeien.

-Er zijn stammen van Neisseria gonorrhoeae die gevoelig kunnen zijn voor de gebruikte concentratie vancomycine. Om deze reden wordt aanbevolen om chocolade-agar te gebruiken aangevuld met isovitalex, maar zonder remmers..

-Er zijn nystatine-resistente giststammen die in dit medium kunnen groeien en de isolatie van pathogene Neisseria's, met name gonokokken, kunnen verstoren..

Referenties

  1. Diagnostische laboratoria van Valtek. Thayer-Martin Agar.2016. Beschikbaar op: com
  2. Britannia Laboratories. Thayer Martin Medium gewijzigd. 2010 Beschikbaar op: britanialab.com
  3. Wikipedia-bijdragers. Thayer-Martin-agar. Wikipedia, de gratis encyclopedie. 26 oktober 2017, 16:33 UTC. Beschikbaar op: wikipedia.org 4. Toegang tot 28 februari 2019.
  4. Britannia Laboratories. GC-agar. 2010 Beschikbaar op: britanialab.com.
  5. Laboratories BBL ™ Medium Verrijking voor veeleisende micro-organismen. 1999. Beschikbaar op: bd.com
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Redactioneel Panamericana S.A. Argentinië.

Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.