De tetrathionate bouillon of TT-bouillon is een selectief vloeibaar kweekmedium voor de verrijking en het herstel van stammen van het geslacht Salmonella. Het is gemaakt door Müeller en later aangepast door Kauffmann, daarom zijn er mensen die het Müeller-Kauffmann-bouillon noemen.
Het oorspronkelijke medium bevatte proteose-peptonen, calciumcarbonaat en natriumthiosulfaat. Kauffmann voegde er galzouten aan toe en creëerde een andere modaliteit met heldergroen. Deze stoffen remmen de groei van coliformen, waardoor het medium vrij blijft voor de ontwikkeling van pathogene bacteriën, in dit geval Salmonella.
De modificatie was zeer succesvol omdat het de gevoeligheid van het medium aanzienlijk verhoogde. Om deze reden is het momenteel nuttig voor het zoeken naar salmonella's in elk type monster, maar vooral voor vaste of vloeibare ontlasting en voedsel..
De voorbereiding bestaat uit twee fasen; het commerciële medium is een basis om de tetrathionaatbouillon te bereiden, en vervolgens, zodat het tetrathionaat kan worden gevormd, wordt een jodiumhoudende jodiumoplossing toegevoegd om het medium te voltooien.
De American Public Health Association (APHA) beveelt het gebruik van tetrathionaatbouillon aan aangevuld met heldergroen aan voor verrijking van monsters voor salmonella, aangezien het selectiever is dan tetrathionaatbouillon en selenietbouillon..
Over het algemeen is tetrathionaatbouillon ideaal wanneer de aanwezigheid van bacteriën van het geslacht Salmonella in kleine hoeveelheden wordt vermoed of wanneer ze worden misbruikt door blootstelling aan remmende stoffen of door industriële processen die hun levensvatbaarheid minimaliseren..
Artikel index
De aanwezige peptonen komen overeen met de vertering van caseïne door de alvleesklier en de vertering van dierlijk weefsel door de maag. Deze vormen de bron van koolstof, stikstof en algemene voedingsstoffen voor bacteriegroei..
Natriumthiosulfaat reageert op zijn beurt met de gejodeerde oplossing om tetrathionaat te vormen. Dit remt de groei van coliformen en bevordert de ontwikkeling van bacteriën die het enzym tetrathionaatreductase bevatten, waaronder het geslacht Salmonella, maar ook Proteus..
Galzouten werken ook als een remmende stof voor de meeste grampositieve en sommige gramnegatieve bacteriën (coliformen)..
Calciumcarbonaat absorbeert de giftige stoffen die worden gegenereerd door de afbraak van tetrathionaat, dat zwavelzuur vormt. In die zin neutraliseert calciumcarbonaat de zuurgraad, waardoor de pH van het medium stabiel blijft..
In het geval van de heldergroene modaliteit verhoogt deze stof het selectieve vermogen van tetrathionaatbouillon door andere micro-organismen dan het Salmonella-geslacht te remmen..
Wegen:
Het kaliumjodide wordt opgelost in ongeveer 5 ml steriel gedestilleerd water, waarna het jodium beetje bij beetje wordt toegevoegd terwijl het mengsel wordt verwarmd. Nadat het volledig is opgelost, vul je aan tot de maatstreep met steriel gedestilleerd water tot een eindvolume van 20 ml..
Weeg 46 gram van het gedehydrateerde medium af en suspendeer in 1 liter steriel gedestilleerd water. Meng en verwarm tot het volledig is opgelost, het kan slechts een paar minuten aan de kook brengen. Niet autoclaveren. De basis van het medium wordt afgekoeld tot ongeveer 45 ° C en op dat moment wordt 20 ml van de gejodeerde oplossing toegevoegd..
Nadat de jodide-oplossing aan het medium is toegevoegd, moet deze onmiddellijk worden gebruikt. Als u niet het hele mengsel wilt gebruiken, gaat u als volgt te werk:
10 ml van het basismedium wordt in buisjes verdeeld en alleen aan die welke met monsters moeten worden geïnoculeerd, wordt 0,2 ml van de gejodeerde oplossing toegevoegd..
Degenen die niet worden gebruikt, kunnen nog steeds in de koelkast worden bewaard, maar aangezien het medium niet is gesteriliseerd, is het ideaal om de exacte hoeveelheid te bereiden die nodig is..
De kleur van het medium vóór het toevoegen van de jodium-jodiumoplossing is melkachtig wit met een wit neerslag en na toevoeging is het bruin met een dicht neerslag. Het waargenomen neerslag is normaal en komt overeen met calciumcarbonaat dat niet oplost. De uiteindelijke pH van het medium is 8,4 ± 0,2.
Om de heldergroene tetrathionaatbouillon te bereiden, worden alle hierboven beschreven stappen uitgevoerd, maar daarnaast wordt 10 ml van de heldergroene oplossing bereid met 0,1% aan het mengsel toegevoegd..
Deze oplossing is als volgt bereid:
Weeg 0,1 g heldergroen af en suspendeer in 100 ml gedestilleerd water. Verhit aan de kook om volledige oplossing te bereiken. Bewaar in een amberkleurige fles.
Voor ontlastingsmonsters (ontlastingcultuur) is het protocol als volgt:
Inoculeer 1 g vaste ontlasting of 1 ml vloeibare ontlasting in een buisje met 10 ml gebruiksklare tetrathionaatbouillon. Schud krachtig en incubeer 6-24 uur aëroob bij 43 ° C.
Neem vervolgens een aliquot van 10 tot 20 µl van de bouillon en subcultuur in een selectief medium voor Salmonella, zoals SS-agar, XLD-agar, heldergroene agar, Hektoen enterische agar, onder anderen..
Tegelijkertijd moeten selectieve media voor salmonella zonder verrijking worden geïnoculeerd met het directe monster (uitwerpselen). Voer bij rectale uitstrijkjes het verzamelde materiaal in de buis en ga verder zoals hierboven beschreven..
Weeg voor voedselmonsters 10 g vast voedsel of 10 ml vloeibaar voedsel af en inoculeer een fles met 100 ml gebruiksklare tetrathionaatbouillon. Ga op dezelfde manier te werk als hierboven beschreven, maar incubeer bij 37 ° C.
Zoals te zien is, zal de relatie tussen het monster en de bouillon altijd 1:10 zijn.
Bekende controlestammen kunnen worden gebruikt om het kweekmedium te testen. De meest gebruikte zijn ATCC-gecertificeerde soorten.
De te gebruiken soorten zijn Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 en Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Voor Salmonella-stammen wordt een uitstekende ontwikkeling verwacht Escherichia coli kunnen een zwakke of regelmatige ontwikkeling hebben en Gram-positieve stammen (Enterococcus en Staphylococcus) zijn gedeeltelijk of volledig geremd.
-Omdat dit medium de groei van Proteus niet remt, gebruiken sommige laboratoria 40 mg / l novobiocine om de ontwikkeling van deze microbiële stam te voorkomen. Het antibioticum moet worden toegevoegd vóór de jodiumjodiumoplossing..
-Na bereiding van het medium inclusief de jodium-jodiumoplossing, mag het niet meer dan 2 uur duren om te worden geïnoculeerd..
-Bij het verdelen van het medium in de buizen moet het mengsel continu worden gehomogeniseerd om het gevormde neerslag opnieuw te suspenderen..
-In minder besmette monsters wordt de tetrathionaatbouillon geïncubeerd bij 35-37 ° C, en in sterk verontreinigde monsters wordt incubatie bij 43 ° C aanbevolen..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.