EMB agar foundation, voorbereiding en gebruik

3626
Egbert Haynes

De EMB-agar is een selectief en differentieel vast kweekmedium dat wordt gebruikt voor de isolatie van gramnegatieve bacillen, voornamelijk van de Enterobacteriaceae-familie, en andere niet-kieskeurige gramnegatieve bacillen. Het is ook bekend onder de afkorting EAM, wat staat voor eosine-methyleenblauw..

Dit medium is gemaakt door Holt-Harris en Teague in 1916. Het bevat pepton, lactose, sucrose, dikaliumfosfaat, agar, eosine, methyleenblauw en water. Het lijkt erg op MacConkey Agar, vooral bij gebruik van Levine's Modified EMB Agar, die geen sucrose bevat.

Metaalglans van Escherichia coli op EMB-agar Bron: Carmen Moreno González [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], van Wikimedia Commons

In feite beslist elk laboratorium of het met het een of het ander wil werken, aangezien ze dezelfde functie vervullen, hoewel ze biochemisch verschillend zijn..

Het heeft zelfs hetzelfde nadeel als klassieke MacConkey-agar in termen van zwermproductie door het geslacht Proteus. Om dit fenomeen te voorkomen, kan de agarconcentratie daarom met maximaal 5% worden verhoogd..

Artikel index

  • 1 Grondgedachte
    • 1.1 Selectief
    • 1.2 Differentieel
  • 2 Voorbereiding
  • 3 toepassingen
  • 4 Kwaliteitscontrole
  • 5 Laatste overwegingen
  • 6 referenties

Basis

Selectief

EMB-agar is subtiel selectief omdat het de anilinekleurstoffen (eosine en methyleenblauw) bevat, die als remmers werken en de groei van de meeste grampositieve bacteriën en enkele kieskeurige gramnegatieve staafjes voorkomen..

Deze agar heeft echter het nadeel dat sommige grampositieve bacteriën de aanwezigheid van remmende stoffen kunnen weerstaan ​​en kunnen groeien als kleine kleurloze puntkolonies, zoals Enterococcus faecalis en een beetje Stafylokokken.

Bepaalde gisten kunnen ook groeien, zoals Candida albicans-complex, wat zeer kleine roze kolonies zal geven. Chlamydosporen kunnen zelfs uit deze gist ontstaan ​​als het monster diep gezaaid is..

Differentiaal

Aan de andere kant is EMB-agar ook een differentieel medium, aangezien deze kleurstoffen samen (eosine en methyleenblauw) de eigenschap hebben om een ​​neerslag te vormen bij een zure pH, en daarom dienen ze als indicatoren voor de productie ervan..

Zo produceren zwak lactose- of sucrose-fermenterende bacteriën binnen 24 tot 48 uur paarse kolonies. Bijvoorbeeld de geslachten Klebsiella, Enterobacter en Serratia.

Die bacteriën die lactose sterk fermenteren, zoals Escherichia coli, of sucrose, zoals Yersinia enterocolitica of Proteus penneri, vormen een groenachtig zwart neerslag, wat bij deze soorten een karakteristieke metaalglans geeft.

Opgemerkt moet worden dat als EMB levine-medium (zonder sucrose) wordt gebruikt, Yersinia enterocolitica Y Proteus penneri zal heldere kolonies produceren.

Bacteriën die lactose of sucrose niet fermenteren, worden gevoed door de aanwezigheid van peptonen, die de aminozuren en stikstof leveren die nodig zijn voor bacteriegroei, en heldere kolonies produceren. Bijvoorbeeld de geslachten Salmonella en Shigella.

Evenzo is het belangrijk op te merken dat het geslacht Acinetobacter lavendelblauwe kolonies kan presenteren, ook al is het geen lactosefermentor of sucrose, maar heeft het de eigenschap om methyleenblauw op zijn celwand te fixeren. Dit kan ook gebeuren met andere oxidatieve bacteriën.

Voorbereiding

Het originele gedehydrateerde medium is lichtbeige van kleur.

Om dit kweekmedium te bereiden, moet 36 gram van het gedehydrateerde medium worden afgewogen en gesuspendeerd in een kolf met een liter gedestilleerd water..

Nadat je het mengsel 5 minuten hebt laten rusten, breng je de kolf naar een warmtebron en meng je krachtig en constant totdat het kookt en volledig oplost..

Vervolgens moet het reeds opgeloste kweekmedium gedurende 15 minuten in de autoclaaf bij 121 ° C worden gesteriliseerd..

Aan het einde van de tijd wordt het uit de autoclaaf gehaald en even laten rusten. Vervolgens wordt, nog warm (45-50 ° C), 15-20 ml agar geserveerd in elke steriele petrischaal. Het medium moet lakmoesblauw zijn.

Na het serveren laat men de borden een beetje onbedekt staan ​​tot de agar iets afkoelt. Ze worden vervolgens bedekt en laten ze volledig stollen. Vervolgens worden ze in omgekeerde bordenhouders besteld en tot gebruik in de koelkast (8 ° C) bewaard..

Deze procedure wordt bij voorkeur uitgevoerd in een afzuigkap met laminaire stroming of voor de bunsenbrander om besmetting te voorkomen.

Het is belangrijk om in gedachten te houden dat elk handelshuis de hoeveelheid zal aangeven die moet worden gewogen om het kweekmedium te bereiden..

De uiteindelijke pH van het medium moet 7,2 ± 0,2 zijn

Toepassingen

Dit medium wordt gebruikt voor het zaaien van urine en uitwerpselen of elk type klinisch specimen, vooral als de aanwezigheid van niet-kieskeurige Gram-negatieve bacillen wordt vermoed, zoals de bacillen van de Enterobacteriaceae-familie, die zeer goed groeien op dit medium..

Enteropathogene bacteriën van de geslachten Shigella en Salmonella onderscheiden zich door hun kleurloze of licht amberkleurige kolonies.

Andere niet-lactose fermenterende bacillen groeien ook, zoals onder andere Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter..

Evenzo is dit medium zeer nuttig bij de microbiologische analyse van voedsel en water, aangezien het ideaal is voor de volledige bevestigingsfase van de bepaling van coliformen, d.w.z. om de aanwezigheid van colibacteriën te bevestigen. E coli van troebele EC-bouillons, van de meest waarschijnlijke nummertechniek (MPN).

QA

Om te verifiëren dat het vers bereide kweekmedium goed werkt, kunnen controlestammen worden geplant om de kenmerken van de kolonies te observeren en te verifiëren dat ze geven zoals verwacht..

Hiervoor zijn ATCC-stammen of goed geïdentificeerde stammen van E coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa en sommige Gram-positieve bacteriën, zoals S. aureus.

Het wordt verwacht dat E coli Genereer goed ontwikkelde blauwzwarte kolonies met een groene metaalglans. Terwijl, Enterobacter aerogenes Y Klebsiella sp ze zouden goed ontwikkelde blauwzwarte slijmkolonies moeten geven.

Voor zijn deel, Salmonella typhimurium Y Shigella flexneri, grote, kleurloze of licht amberkleurige kolonies moeten ontwikkelen.

Eindelijk het genre Pseudomonas aeruginosa groeit als kleurloze kolonies met een onregelmatige grootte, terwijl Gram-positieve bacteriën volledig moeten worden geremd of schaars groeien met zeer kleine kolonies.

Laatste gedachten

Soms zorgt sterilisatie ervoor dat het methyleenblauw wordt verminderd en een medium oranje kleur wordt weergegeven. Om ervoor te zorgen dat het methyleenblauw oxideert en de paarse kleur terugkrijgt, moet het voorzichtig worden gemengd totdat de kleur is hersteld..

Ook kan na sterilisatie de kleurstof neerslaan, dus het moet goed worden gemengd voordat de petrischalen worden geserveerd..

Referenties

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B en Velázquez O. 2009. Technieken voor de microbiologische analyse van voedingsmiddelen. 2e ed. Faculteit Chemie, UNAM. Mexico.
  2. Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C.Karakterisering en distributie van stammen van Escherichia coli Mogelijk pathogeen geïsoleerd uit vleeskuikens van pluimveebedrijven in Peru. Rev. researcha. dierenarts. Peru 2012 23 (2): 209-219. Beschikbaar op: scielo.org.
  3. Laboratorios Conda S.A. Eosine en methyleenblauwe agar. 2010 Beschikbaar op: condalab.com
  4. Britannia Laboratories. Levine E.M.B (met eosine en methyleenblauw) 2011 Beschikbaar op: britanialab.com
  5. BD Laboratoria. BD EMB-agar (eosine-methyleenblauw-agar), gemodificeerd. 2013 Beschikbaar op: bd.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Microbiologische diagnose. (5e ed.). Argentinië, Redactie Panamericana S.A.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott Microbiologische diagnose. 12 ed. Argentinië. Redactioneel Panamericana S.A

Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.