De LIA-agar (Iron Lysine) is een biochemische test die wordt gebruikt voor de identificatie van bacteriën van de Enterobacteriaceae-familie. Dit medium is gemaakt door Edwards en Fife, op basis van de Falkow-formule.
Oorspronkelijk was deze test een bouillon die peptonen, gistextract, glucose, L-lysine, broomkresolpaars en gedestilleerd water bevatte. Edwards en Fife voegden agar-agar, ijzerammoniumcitraat en natriumthiosulfaat toe..
De test bestaat in wezen uit het aantonen van de aanwezigheid van het enzym lysine decarboxylase, dat kan reageren met de carboxylgroep van het aminozuur L-lysine. Een deaminering van het aminozuur kan ook optreden door de aanwezigheid van het enzym lysine deaminase..
Bovendien laat de samenstelling van het medium het bewijs toe van het vermogen van sommige bacteriële geslachten om waterstofsulfide te produceren. Ten slotte is het ook mogelijk om het al dan niet genereren van gas in het medium waar te nemen.
Artikel index
Zoals de meeste kweekmedia bevat lysine-ijzeragar componenten die de bron van voedingsstoffen vormen die nodig zijn voor bacteriegroei. Deze componenten worden vertegenwoordigd door peptonen en gistextract.
Evenzo bevat deze agar glucose als fermenteerbare koolhydraten. Van alle bacteriën in de Enterobacteriaceae-familie is bekend dat ze glucose fermenteren.
Deze stap is cruciaal, omdat het verantwoordelijk zal zijn voor het verzuren van het medium, een essentiële voorwaarde voor het enzym lysine decarboxylase, indien aanwezig, om op zijn substraat in te werken..
In sommige bacteriegeslachten kan gasproductie als gevolg van glucosefermentatie worden waargenomen.
Het gas wordt aangetoond wanneer er een verplaatsing van de agar in de buis is, waardoor een lege ruimte op de bodem van de buis overblijft, of door het medium in twee of meer porties te breken..
Zodra lysine is gedecarboxyleerd, worden diamine (cadaverine) en kooldioxide gevormd.
Decarboxylering vindt plaats in aanwezigheid van pyridoxaalfosfaat-co-enzym. Deze reactie is onomkeerbaar.
Alle pH-veranderingen die optreden in het medium als gevolg van de verschillende reacties worden gedetecteerd door de paarse broomcresol pH-indicator..
In die zin wordt het medium bij verzuring geel en bij alkalisatie keert het medium terug naar zijn oorspronkelijke paarse of paarse kleur..
Wanneer deaminering van lysine optreedt als gevolg van de aanwezigheid van het enzym lysine deaminase, wordt een roodachtige kleur gevormd op het oppervlak, typisch voor de geslachten Proteus, Providencia en sommige soorten Morganella..
Dit komt door het feit dat alfa-keto-carbonzuur wordt gevormd tijdens het deamineringsproces, dat reageert met ammoniumcitraat in aanwezigheid van zuurstof, waardoor de bovengenoemde kleur ontstaat..
Aan de andere kant zullen bacteriën die waterstofsulfide produceren, worden aangetoond door de aanwezigheid van natriumthiosulfaat (bron van zwavel) en ijzer (III) ammoniumcitraat, de ontwikkelaar van HtweeS.
Bacteriën die het enzym thiosulfaatreductase bezitten, kunnen werken door het aanwezige natriumthiosulfaat te verminderen, sulfiet en waterstofsulfide (HtweeS).
Dit laatste is een kleurloos gas, maar wanneer het reageert met het ijzerzout vormt het ferro metallisch sulfide, een onoplosbare verbinding (zichtbaar zwart neerslag).
De vormingscapaciteit van HtweeS met dit medium is niet erg betrouwbaar, omdat sommige lysinedecarboxylase-negatieve bacteriën in staat zijn om H te producerentweeS zal geen zwarte neerslag vormen, aangezien de zuurgraad van het medium interfereert. Daarom wordt aanbevolen om te controleren met andere media die ijzer bevatten.
De buisjes moeten na 24 uur incubatie worden gelezen, anders bestaat het risico dat de reactie verkeerd wordt geïnterpreteerd en valse negatieven worden gerapporteerd.
Er moet aan worden herinnerd dat de eerste reactie die zal optreden de fermentatie van glucose is, daarom worden alle buisjes na 10 tot 12 uur geel..
Als aan het einde van de incubatietijd (24 uur) een gele achtergrond met een paars of paars oppervlak wordt waargenomen, is de reactie negatief. De paarse kleur van het oppervlak komt overeen met de alkalisatie van het medium door het gebruik van peptonen.
Een positieve reactie is er een waarbij de onderkant en het oppervlak van de buis volledig paars zijn, dat wil zeggen dat het terugkeert naar de oorspronkelijke kleur..
Wie de positiviteit van de test bepaalt, is daarom de basis of achtergrond van het medium. Bij twijfel over de kleur kan deze worden vergeleken met een niet-geïnoculeerde LIA-buis.
Een buis die lysinedeaminering vertoont, heeft een roodachtig kastanjebruin oppervlak en een gele (zure) achtergrond, of de hele buis heeft een roodachtige kastanjebruine kleur..
Deze reactie wordt geïnterpreteerd als negatief voor lysinedecarboxylering, maar positief voor lysinedeaminering..
Deze reactie wordt gedefinieerd en geïnterpreteerd op de ring.
Een positieve reactie wordt waargenomen door het verschijnen van een zwart neerslag in het gehele medium of een deel ervan. Meestal tussen de rand van de afschuining en de basis.
Als het neerslag door de hele buis heen voorkomt, zal het de andere reacties die in het midden optreden niet laten zien..
Bij het interpreteren van de test worden de resultaten als volgt vastgelegd:
De ring wordt eerst gelezen, dan de onderkant of blok, dan de productie van HtweeJa, en tot slot gaswinning.
Voorbeeld: K / A + (-). Dit betekent:
Weeg 35 g van het gedehydrateerde ijzer-agarlysinemedium af en los op in een liter gedestilleerd water..
Verhit tot de agar volledig is opgelost, laat het een minuut koken en roer regelmatig. Verdeel 4 ml van het medium in 13/100 reageerbuisjes met katoenen dop.
Steriliseer gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C. Haal uit de autoclaaf en laat schuin staan, zodat er een diepe basis en een korte afschuining ontstaat.
Bewaren in de koelkast 2-8 ° C. Laat opwarmen voordat u de bacteriestam zaait.
Het gedehydrateerde medium is beige en het bereide medium is roodachtig paars..
De uiteindelijke pH van het voorbereide medium is 6,7 ± 0,2
Het medium wordt geel met een pH gelijk aan of lager dan 5,2 en is paars bij een pH van 6,5 en hoger.
Deze test wordt, samen met andere biochemische tests, gebruikt om bacillen van de Enterobacteriaceae-familie te identificeren..
Het medium wordt bezaaid met een rechte lus of naald, een of twee lekke banden worden gemaakt tot aan de onderkant van de buis en vervolgens wordt het oppervlak van het medium in een zigzag gekerfd..
Incubeer gedurende 24 uur bij 35-37 ° C in aerobiose. Incubeer indien nodig nog eens 24 uur..
Het is vooral nuttig om lactose-negatieve Citrobacter-soorten te onderscheiden Salmonellas sp.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.