De orcein is een natuurlijke paarse kleur, gewonnen uit verschillende korstmossen zoals: orchilla of urchilla, lichen fruticoso, Rocella tinctoria Y Lecanora parella hoofdzakelijk. De Rocella tinctoria Het wordt gevonden op het Afrikaanse en Amerikaanse continent, hoewel het kan worden vervangen door andere soorten in Europa.
Deze kleurstof wordt al sinds de oudheid veel gebruikt in cytogenetische studies. In die zin werd het orceïnepreparaat dat azijnzuur bevat geïntroduceerd door LaCourt in 1941, daarom werd het aanvankelijk de LaCourt-techniek genoemd..
Evenzo is het, vanwege zijn eenvoud en lage kosten, gebruikt voor de vervaardiging van lakmoes (kleurstof gewonnen uit korstmossen) en in histologische studies (kleuring van cellen en weefsels)..
Verschillende onderzoeken hebben deze vlek gebruikt in combinatie met andere chemicaliën, zoals ammoniakpicrocarminaat en azijnzuur, om respectievelijk elastische vezels en chromosomen te kleuren. Momenteel wordt orceïne nog steeds gebruikt in de cytogenetische studies van dieren en planten..
Onlangs hebben Silva et al. 2017 heeft deze vlek met succes gebruikt om de verschillende veranderingen die optreden in de elastische vezels van de huid van de duim bij Chileense ouderen te observeren. Deze studie liet zien hoe de vezels van de duim veranderen bij veroudering.
In die zin bleken de elastische vezels bruinzwart van kleur te zijn bij personen ouder dan 80 jaar; terwijl ze bij de jongste (vanaf 60 jaar) worden gezien als een roodbruine kleur. Cytoplasma en andere celstructuren worden geelachtig groen.
Dit maakte het mogelijk de aanwezigheid en conditie van de elastische vezels te bevestigen, in termen van hun plaatsing, hoeveelheid en integriteit. Aan de andere kant is er ook op gewezen dat orceïne een grote hulp is bij het identificeren van aneurysma's en het diagnosticeren van arteritis, naast andere aandoeningen..
Artikel index
Orcein maakt deel uit van de oxazinegroep van kleurstoffen en de kleuring is gebaseerd op zijn affiniteit voor DNA. De kleurstof bindt zich aan de negatieve lading van dit molecuul, vertegenwoordigd door de fosfaatgroep. Daarom zijn de chromosomen paars gekleurd.
De rest van de celstructuren krijgen echter een andere kleur. Specifiek, in het geval van elastische vezels, zijn ze roodbruin gekleurd, celkernen van blauw tot donkerpaars, terwijl collageen niet vlekt.
Om deze reden wordt orceïne gebruikt om chromatine te kleuren en om seks te differentiëren bij sommige soorten vliegen. Evenzo kunnen kernen en sommige leverinsluitsels geproduceerd door hepatitis B-antigenen worden gekleurd..
Orceïne-oplossingen hebben specifieke functies bij het kleuren. Orcein A heeft de functie van het verzachten van de celmembranen, waardoor ze afsterven en het proces van hun deling verlammen. Ondertussen is orceïne B verantwoordelijk voor het voltooien van de kleuring door zijn adhesie aan de chromosomen..
Om een 1% oplossing van aceto-orceïne te bereiden, wordt 2 gram orceïne opgelost in 45 ml ijsazijn, bij voorkeur heet, en 55 ml gedestilleerd water wordt bij kamertemperatuur toegevoegd..
Vervolgens wordt het constant gemengd om de oplossing te homogeniseren, om het later te laten rusten tot het afgekoeld is. Ten slotte wordt het bewaard bij 4 ° C in donkere flessen. Dit preparaat werd door Flores 2012 gebruikt om de rijpingsfasen van eicellen van koeien te observeren..
In dit geval wordt bijvoorbeeld de aceto-orceïne-oplossing op het weefsel geplaatst dat vooraf gedurende 24 uur in azijnzuur-ethanol is gefixeerd. Dit kleuringsproces wordt gedurende 30 minuten uitgevoerd en het weefsel wordt vervolgens verkleurd..
Evenzo kan het worden gebruikt bij de identificatie van organellen in meercellige weefsels. In dit geval wordt een uitstrijkje van het mondslijmvlies gekleurd met een druppel van de aceto-orceïne-oplossing, het dekglaasje wordt op het objectglaasje geplaatst en onmiddellijk kan de kern van de cel met zijn substructuren worden waargenomen.
Bovendien kan orceïne worden bereid met andere chemicaliën zoals melkzuur en propionzuur. Hiervoor wordt één gram orceïne opgelost in een voorgemengde oplossing bij kamertemperatuur van 23 ml melkzuur en 23 ml propionzuur; het volume aanvullen met gedestilleerd water tot 100 ml.
Met deze lacto-propionische orceïne-oplossing is het mogelijk om de verschillende fasen van de meiotische deling van plantencellen te observeren. In dit geval wordt het vooraf gefixeerde en gehydrolyseerde monster gedurende 15 minuten in de lacto-propionische orceïne-oplossing geplaatst en vervolgens wordt het weefsel op microscoopglaasjes uitgespreid..
In de studie van Duque over polyethyleenchromosomen uit 2016 gebruikte hij een preparaat van 2 gram orceïne verdund in azijnzuur en 85% melkzuur, verdund met een azijnzuuroplossing van 65%. Ten slotte keek hij naar de chromosomen in de speekselklieren van de Drosophila melanogaster.
Het is belangrijk op te merken dat afhankelijk van het monster en wat moet worden geëvalueerd, de juiste orceïne-oplossing wordt bereid. Zo wordt bijvoorbeeld 1N zoutzuur aan de orceïne A-oplossing toegevoegd om delende cellen te observeren..
Terwijl de orceïne B-oplossing wordt opgelost in 45% azijnzuur. Deze techniek is een verkorte kleurmethode en wordt over het algemeen gebruikt als hulpmiddel bij het kleuren van chromosomale structuren..
Sinds eeuwen kun je in landen van het Amerikaanse continent zoals Argentinië korstmossen krijgen zoals: Lecanora, Parmelia Y Umbilicaria, die geweldige bronnen van orceïne zijn. Ook Europese gebieden zoals de Canarische Eilanden waren in die tijd grote producenten van de orchilla.
Dit werd geëxporteerd naar andere steden op hetzelfde continent zoals Genua en landen als Engeland, terwijl Holland de productie van lakmoes van de orchilla monopoliseerde. Dus later werd dit korstmos verkleind totdat het op het punt stond uit te sterven.
Dit leidde ertoe dat de orchilla werd vervangen door andere planten met kleureigenschappen. De opkomst van synthetische kleurstoffen heeft echter bijgedragen tot het beëindigen van de handel in deze korstmosbron van orceïne..
Dit was mogelijk dankzij Cocq, die in 1812 de synthese van orceïne beschreef, wetende dat het wordt gesynthetiseerd door een fenolische verbinding genaamd orcinol. Desondanks heeft natuurlijke orceïne momenteel nog steeds de voorkeur.
Dit kan zijn omdat orcinol een zeer sterk ruikende stof is waarvan langdurige blootstelling gezondheidsrisico's met zich meebrengt, zoals het verlies van het vermogen om geuren te detecteren. Deze schade aan de hypofyse kan van tijdelijk naar permanent gaan naarmate de blootstelling groter is..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.