De agar standaard telling Het is een vast, niet-selectief kweekmedium dat is ontworpen voor het kwantificeren van de aërobe microbiële belasting die aanwezig is in monsters van drinkwater, afvalwater, zuiveldranken en andere voedingsmiddelen. Dit medium is ook bekend als PCA-agar, naar het acroniem in het Engels Plate Count Agar. Het werd in 1953 gecreëerd door Buchbinder, Baris en Goldstein.
Het standaard agarmedium is samengesteld uit gistextract, tripteïne, glucose, agar en gedestilleerd water. Deze formulering bevat basisvoedingselementen die de ontwikkeling van de huidige aërobe microbiële belasting mogelijk maken, niet veeleisend.
Omdat het medium geen remmers bevat, kunnen bacteriën zonder enige beperking groeien, waardoor het ideaal is voor algemene kolonie-telling. De plaatkwantificatietechniek zal echter niet alle aanwezige bacteriën detecteren, maar alleen die welke in staat zijn om te groeien onder de omgevingsomstandigheden waaraan de gezaaide standaard agar-agar wordt onderworpen..
In die zin tracht de plaatkwantificatietechniek in het algemeen de hoeveelheid bacteriën van het aërobe mesofiele type te bepalen, dat wil zeggen de bacteriën die zich ontwikkelen bij temperaturen tussen 25 en 40 ° C, met een optimale groeitemperatuur van 37 ° C..
Deze bacteriegroep is erg belangrijk, omdat daar de meeste ziekteverwekkende bacteriën voor de mens worden aangetroffen..
Opgemerkt moet worden dat het soms interessant kan zijn om de hoeveelheid psychrofiele bacteriën in voedsel te kwantificeren. Deze bacteriën zijn bacteriën die zich ontwikkelen bij lage temperaturen (< 20°C) y son las responsables de que los alimentos se descompongan más rápido, aun estando en nevera.
Evenzo kunnen thermofiele bacteriën, die zich ontwikkelen in een bereik van 50 ° C tot 80 ° C of meer, belangrijk zijn in bepaalde soorten voedsel, zoals ingeblikt voedsel..
Microbiële kwantificering wordt uitgedrukt in kolonievormende eenheden (CFU) per gram of milliliter monster.
Artikel index
Het standaard telmedium is ontworpen om de succesvolle groei van niet-kieskeurige aërobe bacteriën mogelijk te maken, aangezien het gistextract, tripteïne en glucose de nodige voedingsstoffen leveren voor een goede microbiële groei..
Aan de andere kant heeft het medium een lichte kleur en een transparant uiterlijk, daarom is het ideaal voor de visualisatie van kolonies die zijn ontwikkeld door de deep seeding-methode (plaatgieten)..
Het tellen van kolonies door middel van de Drigalski spatel-oppervlaktezaaimethode is ook mogelijk..
Wanneer de microbiële belasting hoog is, moeten decimale verdunningen van het onderzochte monster worden gemaakt om de CFU's te kunnen tellen.
Opgemerkt moet worden dat dit medium wordt aanbevolen door de American Public Health Association (APHA) voor het tellen van aërobe mesofielen..
Weeg 23,5 g van het gedehydrateerde medium af en los op in een liter gedestilleerd water. Om volledig op te lossen, moet het mengsel worden verwarmd door regelmatig te roeren tot het kookt. De volgende stappen zijn afhankelijk van de te gebruiken zaaitechniek.
Verdeel door 12 tot 15 ml in reageerbuizen te verdelen. Steriliseer vervolgens gedurende 15 minuten in een autoclaaf bij 121 ° C. Laat verticaal stollen in de vorm van een blok. Bewaar in de koelkast tot gebruik.
Smelt de plug als je hem gaat gebruiken. Eenmaal gesmolten, bewaar het in een waterbad van 44-47 ° C terwijl de monsters worden voorbereid..
Steriliseer het medium in een autoclaaf bij 121 ° C en verdeel vervolgens 20 ml in steriele petrischalen. Laten stollen, omkeren en tot gebruik in de koelkast bewaren.
Tempereerplaten voor gebruik. De pH van het medium moet 7,0 ± 0,2 zijn.
Standard Count Agar wordt gebruikt in de aerobe mesofiele teltechniek tijdens microbiologische analyse van water en voedsel. Het tellen van aërobe mesofielen is noodzakelijk, aangezien dit de hygiënische kwaliteit van het onderzochte monster bepaalt..
De toepassing van deze techniek (met behulp van dit medium) maakt de macroscopische visualisatie van geïsoleerde kolonies mogelijk voor hun kwantificering..
De techniek bestaat uit het volgende:
1) Homogeniseer het monster om de aanwezige bacteriën te herverdelen.
2) Een eerste suspensie wordt gemaakt in een steriele fles of zak, met inachtneming van de verhouding van 10 g of 10 ml monster in 90 ml verdunningsmiddel (10-1.
3) Vanaf de initiële suspensie worden de relevante decimale verdunningen gemaakt, afhankelijk van het type monster. Bijv: (10-twee, 10-3, 10-4Verdunningen worden gemaakt met peptonwater of fosfaatbuffer..
Om dit te doen, neem 1 ml van de oorspronkelijke suspensie en plaats deze in 9 ml verdunningsmiddel, zet de verdunning voort indien nodig en neem nu 1 ml van de verdunning 10-twee enzovoorts.
4) Neem 1 ml van elke verdunning en doe dit in lege steriele petrischalen.
5) Voeg aan elke plaat 12 tot 15 ml standaard agar toe die vooraf is gesmolten en bezonken bij 44 - 47 ° C.
6) Draai de platen voorzichtig om het monster gelijkmatig over de agar te verdelen en te laten stollen..
7) Keer de platen om en incubeer 24 tot 48 uur bij 37 ° C in aerobiose.
8) Aan het einde van de tijd worden de platen onderzocht en worden de kolonies geteld in de verdunning die dit toelaat. Die platen met tussen de 30 en 300 CFU worden gekozen voor de telling.
Het tellen kan handmatig worden gedaan of u kunt de kolonie-tellerapparatuur gebruiken.
De toegestane waarden per ml monster kunnen van land tot land verschillen, afhankelijk van de voorschriften waaronder ze vallen..
De algemene berekening wordt gedaan met behulp van de volgende formule:
Druk de resultaten uit in 1 of 2 cijfers, vermenigvuldigd met de juiste grondtal 10. Voorbeeld: als het resultaat 16.545 is, wordt het afgerond op basis van het derde cijfer naar 17.000 en wordt het als volgt uitgedrukt: 1,7 x 104. Als het resultaat 16.436 was, rond het dan af op 16.000 en druk 1,6 x 10 uit4.
-Inoculeer met 0,1 ml van het directe monster als het vloeibaar is, initiële suspensie 10-1 of 10 opeenvolgende verdunningen-twee, 10-3 etc, in het midden van een standaard agarplaat.
-Verdeel het monster gelijkmatig met een Drigalski spatel of L-vormige glazen staaf en laat 10 minuten staan.
-Keer de platen om en incubeer aëroob bij 37 ° C gedurende 24 tot 48 uur.
-Ga verder met het tellen van de kolonies, kies die platen die in een bereik tussen 20 - 250 CFU liggen.
Voor de berekening wordt de verdunningsfactor toegepast, die het omgekeerde is. Het aantal wordt afgerond op 2 significante cijfers (afronding volgens het derde cijfer) en uitgedrukt in de macht van grondtal 10. Als bijvoorbeeld 224 CFU zonder verdunning in het monster wordt geteld (10-1), Wordt 22 x 10 gerapporteerd1 UFC, maar als het er 225 was, wordt dit 23 x 10 gerapporteerd1 UFC.
Als u nu 199 CFU meetelt in verdunning 10-3, wordt 20 x 10 gerapporteerd4 CFU, maar als 153 CFU in dezelfde verdunning wordt meegeteld, wordt 15 x 10 gerapporteerd4 UFC.
Het standaard kweekmedium kan worden geëvalueerd met behulp van gecertificeerde bekende stammen, zoals: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Bacillus subtilis ATCC 6633, Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Shigella flexneri ATCC 12022.
Als het kweekmedium zich in optimale omstandigheden bevindt, wordt in alle gevallen een bevredigende groei verwacht, behalve voor L. fermentum die regelmatig kunnen optreden.
Om de steriliteit van het kweekmedium te beoordelen, moeten een of twee platen van elke bereide batch (zonder inoculatie) gedurende 24 uur bij 37 ° C in aerobiose worden geïncubeerd. Na deze tijd mag geen groei of kleurverandering van het medium worden waargenomen..
-Smelt de agar niet meer dan één keer.
-Het bereide medium kan tot 3 maanden meegaan, zolang het in de koelkast wordt bewaard en wordt beschermd tegen licht..
-Dit medium is niet geschikt voor kieskeurige of anaërobe micro-organismen.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.