De agar M.R.S.. is een selectief vast kweekmedium, dat wordt gebruikt voor het isoleren en tellen van melkzuurbacteriën, vooral van het geslacht Lactobacillus. Deze agar is in 1960 gemaakt door Man, Rogosa en Sharpe en draagt dezelfde naam, maar vanwege de complexiteit wordt de afkorting M.R.S vaak gebruikt..
Het is samengesteld uit proteose pepton, vleesextract, gistextract, glucose, sorbitanmonoleaat, dikaliumfosfaat, natriumacetaat, ammoniumcitraat, magnesiumsulfaat, mangaansulfaat en agar..
Deze samenstelling maakt de juiste ontwikkeling van melkzuurbacteriën mogelijk uit klinische monsters, zoals uitwerpselen, vaginale afscheiding, orale monsters en moedermelk, evenals zuivel- en vleesproducten.
Het wordt niet routinematig gebruikt in klinische laboratoria, omdat melkzuurbacteriën zelden betrokken zijn bij ziekteprocessen. Op het gebied van voedselmicrobiologie komt het gebruik van M.R.S-agar echter vaker voor..
Aan de andere kant wordt dit medium gebruikt door enkele onderzoekscentra die zich richten op de studie van melkzuurbacteriën..
Artikel index
Man, Rogosa en Sharpe-agar hebben een vrij complexe samenstelling. Door de functie van elk van zijn componenten op te splitsen, kan de basis ervan worden verklaard.
Proteose pepton, vleesextract, gistextract en glucose zijn voedingsstoffen die de bron vormen van koolstof, stikstof, vitamines en mineralen die nodig zijn voor de groei van bacteriën. Bovendien is glucose de universele energiebron die in de meeste kweekmedia wordt gebruikt..
Aan de andere kant, om de groei van melkzuurbacteriën te bevorderen, is de aanwezigheid van cofactoren (kationen) die essentieel zijn in het metabolisme van Lactobacillus en verwante bacteriën noodzakelijk; deze verbindingen zijn de zouten van natrium, magnesium en mangaan.
Evenzo zijn sorbitanmonoleaat of polysorbaat 80 een belangrijke bron van vetzuren omdat ze als voedingsstoffen worden opgenomen..
Bovendien werken sorbitanmonoleaat en ammoniumcitraat door de ontwikkeling van de begeleidende flora, in het bijzonder gramnegatieve bacteriën, te remmen, waardoor het selectieve karakter van deze agar ontstaat..
Ten slotte is de agar-agar degene die de vaste consistentie aan het medium geeft.
Er zijn andere varianten van Man Rogosa Sharpe-agar; een van hen is aangevuld met cysteïne (M.R.S.c), zeer nuttig voor de isolatie van bifidobacteriën, naast andere micro-organismen. Aan de andere kant is er het MRS-medium aangevuld met neomycine, paromomycine, nalidixinezuur en lithiumchloride, vooral voor het selectief tellen van bifidobacteriën in zuivelproducten..
Weeg 68,25 gram van het gedehydrateerde medium af en los op in een liter gedestilleerd water. Laat 5 minuten staan. Om volledig op te lossen, schakelt u onder regelmatig roeren naar een warmtebron en kookt u gedurende 1 tot 2 minuten. Steriliseer gedurende 15 minuten in autoclaaf bij 121 ° C.
Bij het verlaten van de autoclaaf enkele minuten laten staan en warm verdeel in steriele petrischalen..
Laat platen stollen en keer de platen om, bestel ze in bordenrekken en zet ze in de koelkast tot gebruik. Laat de platen voor gebruik op kamertemperatuur komen.
De pH van het medium moet 6,4 ± 0,2 zijn. Sommige commerciële huizen bevelen een pH aan tussen 5,5 en 5,9.
Het gedehydrateerde medium is beige en bereid is donker amberkleurig.
Zowel het gedehydrateerde medium als de voorbereide platen moeten worden bewaard bij 2 tot 8 ° C..
De M.R.S. Ze kunnen op het oppervlak worden gezaaid (uitputting of met een Drigalski-spatel). Het kan ook op diepte worden gezaaid. Platen moeten worden geïncubeerd bij 37 ° C in microaërofiliciteit (4% Otwee en 5-10% COtwee) gedurende 24 tot 72 uur.
De zaaimethode wordt gekozen op basis van het beoogde doel (isoleren of tellen).
Vermoedelijke Lactobacillus-kolonies worden witachtig van kleur en hebben een slijmerig of romig uiterlijk op deze agar. Later moeten ze worden geïdentificeerd.
Hiervoor wordt oppervlakte zaaien gebruikt. De te zaaien monsters vereisen een eerdere procedure.
In het geval van moedermelkmonsters wordt aanbevolen om 1 ml van het monster gedurende 10 minuten bij 14.000 tpm te centrifugeren om de vetlaag te verwijderen. 900 µl wordt weggegooid en in de resterende 100 µl wordt de pellet gesuspendeerd en op het oppervlak van de M.R.S. Het moet dan gelijkmatig worden verdeeld met een Drigalski-spatel..
In het geval van ontlastingsmonsters wordt één (1) gram ontlasting gewogen en gehomogeniseerd in 9 ml 0,1% steriel peptonwater, wat overeenkomt met een verdunning van 1/10. Vervolgens worden seriële verdunningen gemaakt, tot een uiteindelijke verdunning van 10-4.
Ten slotte wordt 100 μl van de 10 verdunningen genomen-twee, 10-3 en 10-4 en elke verdunning wordt gezaaid op MRS-agar, gelijkmatig verdeeld met een Drigalski-spatel.
In dit geval wordt er op diepte gezaaid.
Voor moedermelkmonsters wordt 1 ml afgenomen en in een steriele conische plastic buis geplaatst. MRS-agar wordt toegevoegd bij een temperatuur van ongeveer 40 ° C tot een eindvolume van 25 ml, waardoor een homogeen mengsel wordt verkregen. Vervolgens wordt het op een uniforme manier in steriele petrischalen gegoten en tot polymerisatie met rust gelaten..
Voor ontlastingsmonsters worden verdunningen gemaakt, zoals eerder beschreven. Neem 1 ml van elke verdunning en plaats deze in steriele conische plastic buizen. Gesmolten MRS-agar wordt toegevoegd tot een volume van 25 ml.
Het mengsel van elke verdunning wordt gelijkmatig in steriele petrischalen gegoten. Ten slotte laat men het rusten tot het polymeriseert.
Elke dag wint de studie van melkzuurbacteriën meer belangstelling; Onderzoekers proberen vooral meer te weten te komen over nieuwe stammen en hun potentieel als startfermenten voor standaardisatie bij de productie van onder meer zuivelproducten..
In die zin zeggen Alvarado et al. (2007) gebruikte M.R.S. om een studie uit te voeren waarin ze melkzuurbacteriën isoleerden, identificeerden en karakteriseerden die aanwezig waren in een ambachtelijke Andes-gerookte Venezolaanse kaas.
In de kaas vonden ze de aanwezigheid van bacteriën van de geslachten Lactococcus en Lactobacillus, en concludeerden dat de mengsels van geïsoleerde stammen geschikt zijn als starterstammen bij de bereiding van kaas uit gepasteuriseerde melk..
Aan de andere kant, Sánchez et al. (2017) gebruikte M.R.S. om de aanwezigheid van melkzuurbacteriën in het spijsverteringskanaal van biggen te onderzoeken, om ze te gebruiken als natuurlijke probiotica die de productiviteit van gezonde biggen verhogen.
Met dit medium slaagden ze erin om vier soorten te isoleren: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae Y Pediococcus pentosaceus.
Evenzo, Báez et al. (2019) gebruikte M.R.S. om melkzuurbacteriën (LAB) en bifidobacteriën met probiotisch potentieel in moedermelk en zuigelingenpoep te evalueren.
Ze slaagden erin om 11 BAL en 3 te isoleren Bifidobacteria sp in moedermelk, en 8 BAL en 2 Bifidobacteria sp. in uitwerpselen. Ze voldeden allemaal aan bepaalde parameters die bewijzen dat ze bacteriën zijn met probiotische activiteit.
De auteurs concludeerden dat zowel moedermelk als de ontlasting van uitsluitend zuigelingen die borstvoeding krijgen, dienen als natuurlijke bronnen van probiotische bacteriën..
Om de kwaliteit van M.R.S. Beheers stammen zoals:
Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli en Bacillus cereus.
De verwachte resultaten zijn een bevredigende groei voor de eerste 6 bacteriën, terwijl E coli Y Bacillus cereus moet volledig worden geremd.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.