De Sabouraud-agar, ook bekend als Sabouraud dextrose-agar, het is een vast kweekmedium, speciaal verrijkt voor de isolatie en ontwikkeling van schimmels, zoals gisten, schimmels en dermatofyten..
Daarom mag dit medium niet ontbreken in een microbiologisch laboratorium om de aanwezigheid van pathogene of opportunistische schimmels te onderzoeken, zowel uit klinische als niet-klinische monsters. Evenzo is het ook ideaal voor de groei van draadvormige bacteriën zoals Streptomyces en Nocardias. Het gebruik ervan is erg breed, omdat het kan worden gebruikt in de menselijke, dierlijke, plantaardige en industriële mycologie.
Dit medium werd in 1896 gecreëerd door de prominente dermatoloog Raimond Sabouraud, die een wereldberoemde specialist werd in aandoeningen van de hoofdhuid, voornamelijk veroorzaakt door dermatofyten..
De creatie ervan was zo belangrijk dat het sindsdien is gebruikt en nog steeds is, zij het met enkele aanpassingen.
Hoewel het speciaal is voor schimmels, kunnen bacteriën in dit medium groeien, daarom is voor monsters met gemengde flora de opname van antibiotica in de bereiding ervan vereist en zo de groei van de eventueel aanwezige bacteriële flora te remmen..
De keuze van het antibioticum moet zorgvuldig worden gemaakt en rekening houdend met het type schimmel dat moet worden teruggewonnen, aangezien sommige worden geremd in de aanwezigheid van bepaalde stoffen.
Artikel index
Sabouraud dextrose-agar is een medium dat in zijn oorspronkelijke formulering zwak selectief is, vanwege de zure pH van 5,6 ± 0,2, maar bacteriën kunnen zich nog steeds ontwikkelen, voornamelijk bij langdurige incubaties.
Het medium bevat caseïne-pepton en pancreasvertering van dierlijk weefsel, die de bron vormen van koolstof en stikstof voor de groei van micro-organismen..
Het bevat ook een hoge concentratie glucose, dat fungeert als energiebron en de groei van schimmels over bacteriën bevordert. Allemaal gemengd met agar-agar, een component die het de juiste consistentie geeft..
Aan de andere kant kan Sabouraud dextrose-agar selectief zijn als antibiotica worden toegevoegd..
Met antibiotica is het vooral nuttig bij monsters van wonden, open zweren of elk monster waarin een grote bacteriële besmetting wordt vermoed.
-Sabouraud-agar met chlooramfenicol: ideaal voor het recupereren van gist en draadschimmels.
-Sabouraud-agar met gentamicine en chlooramfenicol: bijna alle draadschimmels en gisten groeien op dit medium en remmen een groot aantal bacteriën, waaronder Enterobacteriaceae, Pseudomonas en Staphylococcus.
-Sabouraud-agar met cycloheximide: het is vooral nuttig voor monsters van de huid of de luchtwegen, zolang het vermoeden dimorfe schimmels is.
Cycloheximide moet met voorzichtigheid worden gebruikt; Hoewel het wordt gebruikt om de groei te remmen van niet-pathogene of omgevingsschimmels en gisten die als contaminanten in een monster aanwezig kunnen zijn, remt het ook de groei van sommige schimmels, zoals Cryptococcus neoformans, Aspergillus fumigatus, Allescheria boydii, Penicillium sp en andere opportunistische schimmels.
-Sabouraud-agar met chlooramfenicol plus cycloheximide: voornamelijk gebruikt om dermatofyten en dimorfe schimmels te isoleren. Het heeft het nadeel dat het sommige soorten opportunistische schimmels remt, zoals Candida geen albicans, Aspergillus, Zygomycetes of C. neoformans.
-Sabouraud-agar met chlooramfenicol, streptomycine, penicilline G en cycloheximide: het is ideaal voor monsters die extreem verontreinigd zijn met bacteriën en saprofytische schimmels, maar het heeft het nadeel dat het de groei van Actinomyces en Nocardias, naast de hierboven genoemde opportunistische schimmels.
Als u de ingrediënten apart heeft, kunt u deze als volgt bereiden:
Wegen:
- 40 gr dextrose
- 10 g pepton
- 15 gr agar-agar
- Meet 1000 ml gedestilleerd water af
Alle ingrediënten worden gemengd, de pH wordt op 5,6 gebracht. De opgeloste stoffen worden opgelost door te koken, 20 ml van het medium wordt verdeeld in buisjes van 25 x 150 mm, zonder rand en bij voorkeur met een katoenen dop..
Afhankelijk van beschikbaarheid kunnen ook andere buismaten worden gebruikt.
Ze worden gedurende 10 minuten geautoclaveerd bij een drukatmosfeer (121 ° C). De autoclaaftijd mag niet worden overschreden. Bij het verlaten van de autoclaaf worden de buizen met behulp van een ondersteuning schuin gezet totdat ze stollen in een fluitpiek..
Een andere manier is om de ingrediënten op te lossen door ze te verwarmen tot ze koken. Autoclaaf in dezelfde kolf gedurende 10 minuten en verdeel vervolgens 20 ml over petrischalen..
Als je een Sabouraud dextrose-agarmedium hebt dat al alle ingrediënten bevat, weeg dan de hoeveelheid af die door het commerciële bedrijf is gespecificeerd voor één liter water. De rest van de stappen zijn dezelfde als die hierboven zijn beschreven.
Wegen:
- 20 gr dextrose
- 10 g pepton
- 17 gr agar-agar
- Meet 1000 ml gedestilleerd water af
Alle ingrediënten worden gemengd, de pH wordt op 6,9 ingesteld. Ga op dezelfde manier te werk als in het vorige geval.
Er zijn commerciële huizen die het medium met alle ingrediënten aanbieden. In dat geval wegen en voorbereiden zoals beschreven op de bijsluiter..
- Weeg 500 mg chlooramfenicolbasis af
- Meet 100 ml ethanol 95% af
- Mengen
Sabouraud dextrose-agarmedium (Emmons) wordt bereid zoals eerder beschreven en voeg bovendien voor elke liter medium 10 ml chlooramfenicol-voorraadoplossing toe voor het autoclaveren..
- Weeg 5 g cycloheximide
- Meet 100 ml aceton af
- Mengen
Sabouraud dextrose-agarmedium (Emmons) wordt bereid zoals eerder beschreven en voeg bovendien voor elke liter medium 10 ml cycloheximidevoorraadoplossing toe voor het autoclaveren..
Sabouraud dextrose-agarmedium (Emmons) wordt bereid zoals reeds beschreven en voeg bovendien voor elke liter medium 10 ml chlooramfenicol-voorraadoplossing en 10 ml cycloheximide-voorraadoplossing toe voor het autoclaveren..
20.000 tot 60.000 eenheden penicilline per liter medium.
30 mg streptomycine per liter medium.
Beide moeten worden verwerkt nadat het medium is geautoclaveerd, licht afgekoeld (50-55 ° C).
0,04 g neomycine per liter medium.
0,04 g gentamicine per liter medium.
Voor de veiligheid verdient het de voorkeur om Sabouraud-dextrose-agar in wigvormige buisjes te zaaien (hellend in fluitbek) in plaats van in petrischalen, om verspreiding en inademing van sporen te voorkomen.
Het is belangrijk dat Sabouraud-agarbuizen bedekt zijn met katoen en niet met een schroefdop, aangezien is aangetoond dat semi-anaërobe omstandigheden de vorming van sporen in sommige stammen remmen. Coccidioides immitis. Bovendien zijn de meeste schimmels aëroob..
Bij gebruik van een schroefdop niet hermetisch sluiten.
De voorbereide media moeten een kwaliteitscontrole ondergaan om de goede werking ervan te verifiëren. Hiervoor worden bepaalde controlestammen gezaaid.
Voor Sabouraud dextrose-agar met chlooramfenicol, ATCC-stammen van Candida albicans, die een uitstekende groei moet hebben. Een andere plaat is ingeënt met stammen Escherichia coli, moet volledig worden geremd.
Er wordt ook een niet-geënte plaat geïncubeerd waarin geen micro-organismen zouden mogen groeien..
Voor Sabouraud dextrose-agar met chlooramfenicol en cycloheximide, stammen van Trichophyton mentagrophytes, zou zich goed moeten ontwikkelen. Een andere plaat is geënt met een stam van Aspergillus flavus, waarin er weinig of geen groei moet zijn. Bovendien wordt een niet-geënte plaat geïncubeerd om zijn steriliteit aan te tonen..
Voor Sabouraud dextrose-agar met cycloheximide, stammen van Candida albicans, Trichophyton rubrum of Microsporum canis, die een goede groei moet vertonen.
Evenzo een soort van Aspergillus flavus, weinig of geen groei vertonen. Incubeer ten slotte een niet-geënte plaat voor controle van de steriliteit..
Klassieke Sabouraud dextrose-agar bevat 4 gram dextrose en is uitstekend geschikt als primair isolatiemedium, aangezien het de karakteristieke morfologie van elke schimmel vertoont..
Het is ook uitstekend geschikt om de pigmentproductie aan te tonen. Het is echter niet het meest geschikte middel om sporulatie te observeren..
Het wordt ook niet aanbevolen om te kweken Blastomyces dermatitidis, die wordt geremd door de hoge concentratie glucose die aanwezig is.
Aan de andere kant moet bij de teelt rekening worden gehouden met bepaalde overwegingen.
Sommige schimmels groeien het beste bij kamertemperatuur, zoals schimmels, andere groeien succesvol bij 37 ° C, zoals sommige gisten, en andere kunnen bij beide temperaturen groeien (dimorfe schimmels).
Om deze reden is het soms nodig om meerdere Sabouraud-agarplaten voor hetzelfde monster te gebruiken, aangezien duplicaatzaaien vaak wordt uitgevoerd om één plaat bij kamertemperatuur en een andere bij 37 ° C te incuberen..
Bijvoorbeeld, Sporothrix schenckii het wordt in twee platen gezaaid; de ene wordt bij kamertemperatuur geïncubeerd om de vormfase te verkrijgen en de andere wordt bij 37 ° C geïncubeerd om de gistfase te verkrijgen, maar in de laatste is het noodzakelijk om 5% bloed aan het medium toe te voegen.
In andere gevallen, zoals mycetomamonsters, worden twee Sabouraud-agarplaten gezaaid, één met chlooramfenicol en de andere met cycloheximide. De eerste zal de groei mogelijk maken van veroorzakers van mycetoom van schimmeloorsprong (Eumycetoma) en de tweede veroorzaker van mycetoom van bacteriële oorsprong, zoals actinomycetomen..
Sabouraud dextrose-agar gemodificeerd door Emmons bevat 2 gram dextrose en wordt niet alleen gebruikt voor isolatie, maar ook voor sporulatie en conservering van schimmels.
In dit medium, als stammen van Blastomyces dermatitidis.
Om champignonculturen te bewaren, kunnen ze in de koelkast (2-8 ° C) worden bewaard. De conserveringstijd kan variëren van 2 tot 8 weken. Na deze tijd moeten ze worden gesubcultiveerd om het proces te herhalen..
Sommige paddenstoelen zijn het beste op kamertemperatuur te bewaren, zoals Epidermophyton foccosum, Trichophyton schoenleinnii, T. violaceum Y Microsporum audounii.
Het onderhoud van de stam kan worden verlengd om pleomorfisme te voorkomen als de dextrose volledig uit de agar wordt verwijderd en als de hoeveelheid agar in het medium wordt verminderd om uitdroging te voorkomen.
Voor de identificatie van sommige draadschimmels is het noodzakelijk om microculturen uit te voeren met behulp van Sabouraud-agar of andere speciale middelen om de structuren van seksuele en aseksuele voortplanting te observeren..
Het wordt voornamelijk gebruikt voor de diagnose van schimmelziekten, vooral die welke de huid en de aanhechtingen (haar en nagels) aantasten.
De monsters kunnen afscheidingen, exsudaten, huid, haar, nagels, sputum, liquor of urine zijn. Vaak geïsoleerde pathogenen zijn dermatofyten, schimmels die onderhuidse en systemische mycosen veroorzaken..
Dieren worden vaak aangetast door schimmelinfecties, daarom is Sabouraud-agar net zo nuttig in de mycologie van dieren als bij mensen..
Dermatofyten kunnen bijvoorbeeld vaak dieren treffen. Dat is het geval bij Microsporum canis var distortum, Het infecteert regelmatig honden, katten, paarden, varkens en apen. hetzelfde, Microsporum gypseum infecteert honden, katten en vee.
Vogels zoals kippen, hanen en kippen hebben er last van Microsporum gallinae.
Andere schimmels, zoals Zymonema farciminosum, Ze zijn ook de oorzaak van ziekten bij dieren, voornamelijk paarden, muilezels en ezels, en veroorzaken aanzienlijke ontstekingen in de lymfevaten..
Sporothrix schenkii en Histoplasma capsulatum invloed hebben op huisdieren en mensen.
Veel pathogene of opportunistische schimmels kunnen zich op elk moment in een bepaalde omgeving concentreren, vooral in operatiekamers en Intensive Care Units (ICU's) van klinieken en ziekenhuizen. Daarom is het noodzakelijk om er een controle op uit te voeren.
Andere kwetsbare ruimtes zijn bibliotheken en oude gebouwen, die kunnen worden aangetast door de concentratie van omgevingsschimmels.
In milieustudies wordt Sabouraud dextrose-agar gebruikt voor het isoleren van schimmels..
Sabouraud dextrose-agar mag niet ontbreken voor de studie van verontreinigende schimmels bij de productie van onder meer cosmetica, voedsel, dranken, leer, textiel..
Planten lijden ook aan ziekten veroorzaakt door schimmels, die verschillende delen van de plant aantasten, die zelfs de oogst kunnen beëindigen, waardoor grote verliezen in de landbouw ontstaan..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.