De bloed agar het is een verrijkt, differentieel maar niet-selectief vast kweekmedium. Het wordt gebruikt voor het terugwinnen en groeien van een grote verscheidenheid aan micro-organismen uit klinische monsters of voor subculturen..
Klassieke bloedagar moet worden opgenomen voor het zaaien van de meeste klinische monsters die in het laboratorium worden ontvangen; behalve voor ontlastingsmonsters waar het niet bruikbaar is, tenzij voorbereid met bepaalde aanpassingen.
Dit kweekmedium bestaat in wezen uit een verrijkte basisagar en 5% bloed. De agarbasis kan variëren naargelang de behoeften, maar zal voornamelijk bestaan uit onder andere peptonen, aminozuren, vitamines, vleesextract, natriumchloride, agar..
Met betrekking tot bloed is het normaal gesproken vereist om contact te hebben met een vivarium om bloed te verkrijgen van dieren, zoals schapen, konijnen of paarden. Dit is echter niet altijd mogelijk en soms wordt menselijk bloed gebruikt..
Bloedagarmedium kan in het laboratorium worden bereid of kant-en-klaar bij gespecialiseerde bedrijven worden gekocht. De bereiding van dit medium is een van de meest delicate, elke onzorgvuldigheid bij de bereiding zal resulteren in een besmette batch.
Daarom moeten alle mogelijke voorzorgsmaatregelen worden genomen en moet er uiteindelijk een kwaliteitscontrole worden uitgevoerd door incubatie bij 37 ° C 1 plaat voor elke 100 die wordt bereid.
Artikel index
Bloedagar is een verrijkt medium omdat het als belangrijkste additief 5-10% bloed op agarbasis bevat. Beide verbindingen bevatten veel voedingsstoffen en dankzij deze eigenschap kunnen de meeste kweekbare bacteriën erin groeien..
Die groei vindt zonder beperking plaats; om deze reden is het niet-selectief. Als er echter verbindingen aan dit medium worden toegevoegd die de groei van sommige micro-organismen voorkomen en die van andere bevorderen, wordt het selectief. Dit is het geval als bepaalde soorten antibiotica of antischimmelmiddelen worden toegevoegd.
Evenzo is bloedagar een differentieel medium, omdat het ons in staat stelt om 3 soorten bacteriën te onderscheiden: bèta-hemolytisch, alfa-hemolytisch en gamma-hemolytisch..
Bèta-hemolytica zijn middelen die de mogelijkheid hebben om rode bloedcellen volledig te lyseren of te breken, waardoor ze een heldere halo vormen rond de kolonies, daarom produceren ze ß- of ß-hemolyse en worden de micro-organismen ß-hemolytica genoemd..
Voorbeelden van ß-hemolytische bacteriën zijn Streptococcus pyogenes Y Streptococcus agalactiae.
Alfa-hemolytica zijn die die gedeeltelijke hemolyse uitvoeren, waarbij hemoglobine wordt geoxideerd tot methemoglobine, waardoor een groenachtige verkleuring rond de kolonies wordt gegenereerd. Dit fenomeen staat bekend als α-hemolyse of α-hemolyse en bacteriën worden geclassificeerd als α-hemolytisch..
Voorbeelden van α-hemolytische bacteriën zijn Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus van de groep viridans.
Ten slotte zijn er de zogenaamde gamma-hemolytische of niet-hemolytische bacteriën. Deze groeien op de agar zonder er veranderingen op aan te brengen, een effect dat bekend staat als γ-hemolyse, en de micro-organismen zijn γ-hemolytisch.
Voorbeeld van γ-hemolytische bacteriën: enkele stammen van groep D Streptococcus (Streptococcus bovis en Enterococcus faecalis.
Het kweekmedium voor bloedagar is een van de meest gebruikte kweekmediums in het microbiologielaboratorium..
Onder de micro-organismen die in het bloedagarmedium kunnen groeien, zijn: strikt aërobe, facultatieve, microaërofiele, anaërobe, grampositieve of gramnegatieve bacteriën, snelgroeiende of langzaam groeiende bacteriën.
Sommige uit voedingsoogpunt veeleisende of kieskeurige bacteriën groeien ook, evenals schimmels en gisten. Evenzo is het nuttig om subculturen uit te voeren of stammen te reactiveren die metabolisch zeer zwak zijn..
De keuze van de bloedgroep en de basisagar zal echter variëren afhankelijk van het waarschijnlijke micro-organisme waarvan wordt vermoed dat het herstelt en het gebruik dat aan de plaat zal worden gegeven (kweek of antibiogram)..
Bloed kan een lam, konijn, paard of mens zijn.
Het meest aanbevolen is lamsbloed, op enkele uitzonderingen na. Bijvoorbeeld om Haemophilus-soorten te isoleren, waarbij het aanbevolen bloed paarden- of konijnenbloed is, aangezien lamsbloed enzymen bevat die factor V remmen.
Het minst aanbevolen is voor mensen, maar het wordt het meest gebruikt, misschien omdat het het gemakkelijkst te verkrijgen is.
Het bloed moet zijn gedefibrineerd, verkregen zonder enig type toevoegingsmiddel en van gezonde dieren. Bij het gebruik van menselijk bloed moet met verschillende factoren rekening worden gehouden:
Als het bloed afkomstig is van personen die bacteriële infecties hebben gehad, zullen ze specifieke antilichamen hebben. Onder deze omstandigheden wordt de groei van sommige bacteriën waarschijnlijk geremd..
Als het wordt verkregen uit de bloedbank, bevat het citraat en het is mogelijk dat bepaalde bacteriën in zijn aanwezigheid niet groeien. Als het bloed daarentegen afkomstig is van patiënten die antibiotica gebruiken, kan de groei van gevoelige bacteriën worden geremd..
En als het bloed afkomstig is van iemand met diabetes, verstoort een teveel aan glucose de juiste ontwikkeling van hemolysepatronen.
De basisagar die wordt gebruikt voor de bereiding van bloedagar kan erg breed zijn. Onder hen zijn: voedingsagar, hersenhartinfusie-agar, trypticase-soja-agar, Müeller Hinton-agar, Thayer Martin-agar, Columbia-agar, Brucella-agar, Campylobacter-agar, enz..
Deze basis wordt het minst gebruikt, aangezien er voornamelijk niet-veeleisende bacteriën, zoals darmbacillen, in groeien., Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, onder andere. Het wordt niet aanbevolen om Streptococcus te isoleren.
Het is een van de meest gebruikte bloedagar-basis, omdat het de nodige voedingsstoffen bevat voor de groei van de meeste bacteriën, waaronder Streptococcus sp en andere kieskeurige bacteriën. Hoewel niet geschikt voor het waarnemen van hemolysepatronen.
Met deze basis wordt over het algemeen lamsbloed gebruikt.
Bloedagarvarianten kunnen ook worden bereid, waarbij andere verbindingen worden toegevoegd om bepaalde micro-organismen te isoleren. Bijvoorbeeld, hersen-hartinfusie-agar aangevuld met konijnenbloed, cystine en glucose, dient om te isoleren Francisella tularensis.
Terwijl het met cystinetelluriet nuttig is voor het isoleren van Corynebacterium diphteriae. Menselijk bloed of lamsbloed kan worden gebruikt.
Bij de eerste bèta-hemolyse wordt de halo gezien als een smalle halo, terwijl bij de tweede de halo veel breder zal zijn.
Evenzo wordt deze basis samen met bacitracine, maïszetmeel, paardenbloed en andere verrijkingssupplementen (IsoVitaleX) gebruikt voor de isolatie van het geslacht Haemophilus sp van respiratoire monsters.
Ook als de combinatie van antibiotica chlooramfenicol - gentamicine of penicilline - streptomycine met paardenbloed wordt toegevoegd, is het ideaal voor het isoleren van veeleisende pathogene schimmels, zelfs met een hogere opbrengst dan Sabouraud glucose-agar. Het is vooral handig bij het isoleren Histoplasma capsulatum.
Deze basis wordt het meest aanbevolen voor een betere observatie van het hemolysepatroon en voor het uitvoeren van diagnostische tests zoals optoquine taxa en bacitracine. Het is de klassieke bloedagar die routinematig wordt gebruikt.
Met deze basis kun je ook de speciale bloedagar bereiden Corynebacterium diphteriae, met cystinetelluriet Y lamsbloed.
Evenzo is de combinatie van deze agar met lamsbloed plus kanamycine-vancomycine ideaal voor de groei van anaëroben, vooral Bacteroides sp.
Deze basis aangevuld met bloed wordt gebruikt om het antibiogram van veeleisende micro-organismen uit te voeren, zoals Streptococcus sp.
Het is ook nuttig voor het isoleren van bacteriën zoals Legionella pneumophila.
Dit medium is ideaal als basis voor bloedagar, vooral wanneer het geslacht Neisseria wordt vermoed Neisseria meningitidis, net zo N. gonorrhoeae groeit niet op bloedagar.
Het wordt ook gebruikt om gevoeligheidstests uit te voeren Neisseria meningitidis.
Deze basis is uitstekend geschikt voor het uitzaaien van maagbiopsiespecimens Helicobacter pylori.
Het medium wordt bereid door 7% lamsbloed toe te voegen dat is gedefibrineerd met antibiotica (vancomycine, trimethoprim, amfotericine B en cefsulodine) om de groei van andere soorten bacteriën die aanwezig kunnen zijn, te beperken..
Deze zelfde base aangevuld met menselijk of lamsbloed, nalidixinezuur en colistine is nuttig om te isoleren Gardnerella vaginalis. Ook ideaal voor het beoordelen van antimicrobiële gevoeligheid voor antibiotica van hetzelfde micro-organisme.
Bovendien wordt het gebruikt voor de bereiding van bloedagar voor de teelt van anaëroben, waarbij aminoglycosiden en vancomycine worden toegevoegd..
Met deze basis kunt u de hemolysepatronen goed observeren.
Dit medium dat wordt gebruikt als basis voor bloedagar samen met de toevoeging van vitamine K is ideaal voor de kweek van anaërobe bacteriën. In dit geval wordt het gebruik van lamsbloed aanbevolen..
Campylobacter-agar aangevuld met 5% schapenbloed en 5 antibiotica (cefalothine, amfotericine B, trimethoprim, polymyxine B en vancomycine), is het medium dat wordt gebruikt om Campylobacter jejuni in ontlastingsmonsters.
Elk handelshuis brengt de instructies om een liter kweekmedium te bereiden op de achterkant van de container. De bijbehorende berekeningen kunnen worden gemaakt om de gewenste hoeveelheid te bereiden, afhankelijk van de geselecteerde basisagar.
De basisagar is gedehydrateerd (poeder), daarom moet het worden opgelost in gedestilleerd water ingesteld op pH 7,3.
De hoeveelheid die wordt aangegeven door de gekozen basisagar wordt afgewogen en opgelost in de overeenkomstige hoeveelheid water in een kolf, vervolgens verwarmd op matig vuur en gemengd met roterende bewegingen totdat al het poeder is opgelost..
Eenmaal opgelost, steriliseren in een autoclaaf bij 121 ° C gedurende 20 minuten.
Bij het verlaten van de autoclaaf laat men de kolf afkoelen tot de temperatuur schommelt tussen 40 en 50 ° C; Het is een temperatuur die de menselijke huid ondersteunt en tegelijkertijd is de agar nog niet gestold.
Om dit te doen, wordt de kolf met de hand aangeraakt en als de warmte draaglijk is, is het de ideale temperatuur om de overeenkomstige hoeveelheid gedefibrineerd bloed toe te voegen (50 ml voor elke liter agar). Meng voorzichtig om te homogeniseren.
De doorgang van bloedaggregatie is cruciaal, want als het wordt gedaan wanneer het medium erg heet is, zullen de rode bloedcellen afbreken en zal het medium niet dienen om hemolyse waar te nemen.
Als het te koud wordt toegevoegd, zullen er klonten ontstaan en zal het oppervlak van de media niet glad zijn om een goede inkeping mogelijk te maken..
Serveer in steriele petrischalen onmiddellijk na het homogeniseren van het bloed. In elke petrischaal wordt ongeveer 20 ml gegoten. Deze procedure wordt uitgevoerd in een afzuigkap met laminaire stroming of nabij de brander.
Bij het serveren van de bloedagar in de petrischalen mogen er geen luchtbellen op het oppervlak van de plaat achterblijven. Als dit gebeurt, gaat de vlam van de bunsenbrander snel over de plaat om ze te elimineren..
De platen mogen stollen en tot gebruik omgekeerd in een koelkast (2-8 ° C) worden bewaard. Voordat de bloedagarplaten worden gebruikt, moeten ze worden getemperd (op kamertemperatuur laten komen) om te kunnen worden gezaaid..
De voorbereide borden gaan ongeveer 1 week mee.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.