De Trypticasein Soja Agar of Trypticase Soja-agar is een vast, niet-selectief en voedzaam kweekmedium. Het wordt aangeduid met de letters TSA voor het acroniem in het Engels Trypticase Soy Agar. Het is samengesteld uit tripteïne, soja-pepton, natriumchloride en agar-agar.
Vanwege zijn hoge voedingskracht is het ideaal voor de kweek van matig veeleisende en niet-veeleisende micro-organismen. Het medium zonder aanvullende supplementen wordt niet aanbevolen voor primaire culturen, maar het is erg handig voor het subculturen van pure soorten en ze levensvatbaar te houden, naast andere toepassingen..
Deze agar dient ook als basis voor de bereiding van verrijkte media zoals bloedagar, vooral wanneer het nodig is om de hemolysepatronen te observeren en om de optoquine- en bacitracine-taxa te monteren, vereist bij de diagnose van Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus pyogenes respectievelijk.
Aan de andere kant is het in combinatie met antibiotica nuttig om facultatieve en strikt anaërobe micro-organismen van klinisch belang te isoleren uit monsters met gemengde flora..
Ten slotte voldoen de samenstelling en de prestaties van trypticaseïne-soja-agar aan de vereisten van de verschillende farmacopeeën (Europees, Japans en Noord-Amerikaans)..
Artikel index
Voor een goede ontwikkeling van bacteriën is de aanwezigheid van energievoorraden noodzakelijk, zoals aminozuren, vitamines, pure en pyrimidische basen..
In die zin leveren tripteïne en soja-pepton deze voedingsstoffen aan micro-organismen, waardoor ze zich volledig kunnen ontwikkelen. Voor kieskeurige bacteriën is het echter noodzakelijk om deze agar aan te vullen met gedefibrineerd bloed of opgewarmd bloed om de verrijking ervan te verhogen..
Aan de andere kant, als antibiotica aan het medium worden toegevoegd, wordt het een selectief medium. U kunt ook 0,6% gistextract toevoegen om de isolatie van soorten van het geslacht Listeria te bevorderen, terwijl de toevoeging van cystinetelluriet Y lamsbloed is daar ideaal voor Corynebacterium diphteriae.
Ten slotte zorgt het natriumchloride voor de osmotische balans van het medium en de agar voor de vaste consistentie..
Om trypticaseïne-soja-agar te bereiden, moet 40 g van het gedehydrateerde commerciële medium op een digitale weegschaal worden gewogen. Het lost op in een liter gedestilleerd water in een kolf.
Het mengsel wordt 5 minuten met rust gelaten en daarna naar een warmtebron gebracht om het medium te helpen oplossen. Het moet regelmatig worden geroerd en 1 of 2 minuten worden gekookt. Vervolgens wordt het medium gedurende 15 minuten gesteriliseerd in de autoclaaf bij 121 ° C.
Laat afkoelen tot 50 ° C en verdeel over steriele petrischalen. Laten stollen, omkeren, in plakjes schikken en in de koelkast bewaren.
De uiteindelijke pH van het medium moet 7,3 ± 0,2 zijn.
Opgemerkt moet worden dat de kleur van het gedehydrateerde kweekmedium lichtbeige is en moet worden bewaard tussen 10 en 35 ° C, op een droge plaats.
De bereide agar van zijn kant is licht amberkleurig. Bereide borden moeten tot gebruik in de koelkast (2 tot 8 ° C) worden bewaard..
Platen moeten vóór gebruik op kamertemperatuur komen.
Bloedagar wordt bereid door 5% gedefibrineerd bloed toe te voegen bij afkoeling van de tryptische soja-agar tot 50 ° C. Het mengsel wordt gehomogeniseerd door met zachte bewegingen te roteren.
Serveer in steriele petrischalen. De middelste kleur moet kersenrood zijn.
Om de op TSA gebaseerde bloedagar te bereiden, gaat u op dezelfde manier te werk als de reeds beschreven procedures, maar wanneer u de autoclaaf verlaat, laat u deze rusten totdat de temperatuur van het medium ongeveer tussen 56 en 70 ° C is. Op dat moment wordt het bloed geplaatst en gemengd totdat het medium bruin wordt..
Serveer in steriele petrischalen. De kleur van het medium is chocoladebruin.
De agar-bereidingsprocedure is dezelfde als die beschreven voor borden, met het verschil dat in plaats van het medium op petrischalen te serveren, het wordt verdeeld over 10 tot 12 ml in buizen met bakelieten deksel voordat het wordt gesteriliseerd..
Vervolgens worden de buizen gedurende 15 minuten geautoclaveerd bij 121 ° C. Bij het vertrek leunen ze met behulp van een steun en laten ze stollen.
De voorbereide wiggen worden per oppervlak gezaaid en dienen om bepaalde niet-veeleisende micro-organismen gedurende een bepaalde tijd levensvatbaar te houden..
Trypticaseïne Soja Agar wordt gebruikt in de volgende gevallen:
-Als basis voor het bereiden van de klassieke bloedagar die in de meeste laboratoria routinematig wordt gebruikt.
-De isolatie van kieskeurige bacteriën.
-Het hemolysepatroon observeren.
-Diagnostische tests uitvoeren.
-Als basis voor het bereiden van speciale bloedagar voor Corynebacterium diphteriae, met cystinetelluriet Y lamsbloed.
-Als basis voor de bereiding van lamsbloedagar, plus kanamycine-vancomycine voor de groei van anaëroben, vooral Bacteroides sp.
-Voor het onderhoud van niet-veeleisende stammen (Bacterioteca).
-Aërobe microbiële telling in de microbiële limietstudie van water-, milieu-, voedsel- en cosmetische monsters.
Monsters kunnen rechtstreeks op het oppervlak van trypticaseïne-soja-agar worden gezaaid, aangevuld met bloed of andere toevoegingen. Het wordt gezaaid door uitputting.
Terwijl trypticaseïne-soja-agarplaten zonder toevoegingen over het algemeen worden gebruikt om microbiële stammen (bacteriën of gist) te subculturen..
Om de steriliteit te controleren van de verschillende media die zijn bereid met trypticaseïne-sojabasisagar, wordt aanbevolen om het volgende te doen: van elke bereide batch moeten 1 of 2 ongeïnoculeerde platen of buisjes 24 uur bij 37 ° C worden geïncubeerd om hun steriliteit aan te tonen. In alle gevallen moet het zonder groei blijven.
Als er een besmetting wordt gevonden, moet de hele batch worden weggegooid..
De volgende bacteriestammen kunnen worden gebruikt om de goede werking van trypticaseïne-soja-agar te bestuderen: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 en Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Stammen worden gezaaid en aëroob geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 24 uur.
In alle gevallen moet de groei bevredigend zijn.
Paddestoelen zoals Complex kunnen ook worden gebruikt Candida albicans ATCC 10231 en Aspergillus niger ATCC 16404. Voor beide stammen wordt een goede groei verwacht.
De volgende stammen kunnen worden gebruikt om de goede werking van de met deze basis bereide bloedagar te verifiëren: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 en Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
Ze worden gezaaid en 24 uur geïncubeerd bij 37 ° C in microaërofiliciteit..
In alle gevallen moet de groei bevredigend zijn, rekening houdend met het feit dat in S. pyogenes beta-hemolyse (heldere halo rond de kolonie) moet worden waargenomen en in beide stammen van S. pneumoniae alfa-hemolyse (groenachtige halo rond kolonies) moet in acht worden genomen.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.