De bismutsulfiet-agar is een solide, selectief en differentieel kweekmedium, speciaal ontwikkeld voor het isoleren van Salmonella enterica subgroep enterica serotype Typhi, onder andere soorten salmonella. Het medium staat bekend als BSA-agar vanwege het acroniem in het Engels Bismuth Sulfite Agar..
De oorspronkelijke formule voor bismutsulfietagar werd in 1927 gecreëerd door Wilson en Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Dit bevatte natriumsulfiet, glucose, bismutoplossing, ammoniumcitraat, ferrosulfaat en agar-agar..
Tegenwoordig is er een wijziging van het oorspronkelijke medium, bestaande uit vleesextract, vlees- en caseïnepeptonen, bismutsulfietindicator, glucose, dinatriumfosfaat, ferrosulfaat, heldergroen en agar-agar..
Er zijn veel manieren om Salmonella-soorten te isoleren, maar als het gaat om het terugwinnen van het Typhi-serotype, heeft bismutsulfietagar een opmerkelijk voordeel ten opzichte van hen, aangezien in de meeste gevallen een zeer laag of geen herstel van dit micro-organisme wordt verkregen..
Het is echter nodig om meer dan één type medium te gebruiken bij het isoleren van enteropathogenen, omdat bismutsulfietagar minder effectief is voor andere Salmonella-soorten en voor het Shigella-geslacht, die worden geremd of zich zeer slecht ontwikkelen. In deze agar.
Opgemerkt moet worden dat van alle Salmonella-soorten het Typhi-serotype een van de belangrijkste enteropathogenen bij de mens is, aangezien dit het enige reservoir is. Deze serovar veroorzaakt buiktyfus, gastro-enteritis, bacteriëmie en bloedvergiftiging..
Om deze reden is het relevant om deze agar op te nemen bij het analyseren van water, uitwerpselen of voedselmonsters waarvan de aanwezigheid wordt vermoed..
Artikel index
Zoals de meeste kweekmedia bevat bismutsulfietagar voedingsstoffen om bacteriegroei te bevorderen, zoals peptonen en vleesextract. Evenzo werkt glucose als een bron van energie en koolstof..
Niet alle bacteriën zullen echter op dit medium groeien, aangezien bismutsulfietagar een selectief medium is. Het bevat verbindingen die de groei van grampositieve micro-organismen en bepaalde gramnegatieve bacteriën remmen. Deze verbindingen zijn: de indicator bismutsulfiet en heldergroen.
Dinatriumfosfaat van zijn kant handhaaft de osmolariteit en pH van het medium.
Bovendien is bismutsulfietagar een differentieel medium dankzij de aanwezigheid van ferrosulfaat, dat de vorming van H laat zientweeS. De HtweeS gevormd door bacteriën reageert met ferrosulfaat en vormt een duidelijk zichtbaar onoplosbaar zwart neerslag.
Ten slotte zorgt de agar-agar voor de vaste consistentie van het medium..
Weeg 52,3 g van het gedehydrateerde medium af en los op in een liter water. Verwarm het mengsel gedurende 1 minuut onder regelmatig roeren tot het volledig is opgelost. Oververhit niet te veel. Dit medium wordt niet geautoclaveerd omdat extreme hitte het kweekmedium beschadigt..
Laat afkoelen tot 45 ° C en schud voor het serveren in steriele petrischalen. Het wordt aanbevolen om platen met een goede dikte te maken. Hiervoor moet 25 ml op elk bord worden gegoten. Laat stollen. Aangezien het een medium is dat niet is gesteriliseerd, is het normaal dat het onmiddellijk wordt aanbevolen.
Uit een studie van D'aoust in 1977 bleek echter dat er sprake is van een beter herstel van Salmonella typhimurium Y Salmonella enteritidis naarmate bismutsulfietagar Medium ouder wordt, wordt de prestatie van serovars niet beïnvloed Typhi Y Paratyphi B.
D'aoust raadt aan om de platen op dag 4 van de koeling te gebruiken, hoewel hij waarschuwt dat naarmate het medium ouder wordt, de selectiviteit afneemt, waardoor Proteus vulgaris.
Om deze reden verdient het voor sterk verontreinigde monsters, zoals uitwerpselen, de voorkeur om het vers bereide medium te gebruiken. Anders gebruiken op dag 4 van de bereiding. Andere auteurs raden aan om de borden de dag na hun bereiding te gebruiken, wanneer ze in de koelkast worden bewaard..
Gekoelde platen moeten voor gebruik worden getemperd. De pH van het medium moet 7,5 ± 0,2 zijn. De kleur van het ruwe medium is beige en het bereide medium is groenachtig grijs opaalachtig.
Onder de monsters die in dit medium kunnen worden geplant, zijn monsters van uitwerpselen, drinkwater of afvalwater en voedsel..
Om de isolaten te verbeteren, wordt aanbevolen om een voorverrijkingsbehandeling uit te voeren met lactosebouillon en na verrijking met tetrathionaatbouillon of cystineselenietbouillon, alvorens te zaaien op bismutsulfietagar..
De platen worden gedurende 24 tot 48 uur bij 35 ° C ± 0,2 geïncubeerd in aerobiose.
De koloniën van Salmonella Typhi ze worden meestal binnen 24 uur op deze agar gezien met een zwart centrum en omgeven door een heldergroene halo. Terwijl ze in 48 uur volledig zwart worden door de vorming van waterstofsulfide.
Salmonella Paratyphi A het presenteert kolonies met variabele kenmerken. Na 18 uur incubatie kunnen zwarte, groene of transparante kolonies met een slijmachtig uiterlijk worden waargenomen. Terwijl ze na 48 uur volledig zwart zijn en soms een uitgesproken metaalachtige glans hebben..
S. Paratyphi A neigt ertoe de omgeving rond de kolonie zwart te maken.
Salmonella sp tonen zwarte of groenachtig grijze kolonies, met of zonder metaalglans, en kunnen de omgeving al dan niet zwart maken.
Coliforme soorten worden over het algemeen volledig geremd, maar als ze groeien, ontwikkelen ze zich als ondoorzichtige groene of bruine kolonies zonder metaalglans. Maak geen vlekken op het medium rond de kolonie.
-Zeer zwakke inocula kunnen kolonies van Salmonella Typhi lichtgroen van kleur, onopgemerkt blijven en de cultuur wordt als negatief gerapporteerd.
- Bismutsulfietagar kan het herstel van sommige Salmonella-soorten remmen, zoals S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.
-Dit medium remt de meeste soorten van het geslacht Shigella.
- S. Typhi en S. arizonae kan zeer vergelijkbare kolonies geven.
-Coliformen die H producerentweeS zoals Proteus en Citrobacter produceren kolonies die vergelijkbaar zijn met die van Salmonella, daarom is het noodzakelijk om biochemische identificatietests uit te voeren.
-Er moet goed worden gestreept om geïsoleerde kolonies te verkrijgen; het is de enige manier om de typische kenmerken van kolonies van het geslacht Salmonella te observeren.
Voor de steriliteitscontrole wordt een niet-geënte plaat bij 37 ° C geïncubeerd, er wordt verwacht dat er geen groei of kleurverandering is..
Voor kwaliteitscontrole, bekende soorten zoals:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Het wordt verwacht dat Escherichia coli Y Shigella flexneri worden gedeeltelijk geremd door respectievelijk groenachtig bruine en bruine kolonies te ontwikkelen. Terwijl beide salmonella's een uitstekende ontwikkeling moeten hebben met zwarte kolonies met een metaalglans, en tenslotte Enterococcus faecalis moet volledig worden geremd.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.