De Biureet is een reagens dat wordt gebruikt voor de bepaling van eiwitten met lange en korte ketens. Het wordt vooral gebruikt op het gebied van analytische chemie en urineonderzoek om de concentratie van totale eiwitten in serum, plasma en urine te onderzoeken..
Eiwitwaarden kunnen bij bepaalde pathologieën worden verhoogd of verlaagd. Symptomen van hypoproteïnemie treden meestal op bij patiënten met een nieraandoening, bij ondervoede patiënten en bij patiënten met chronische infecties..
Hoewel hyperproteïnemie wordt waargenomen bij pathologieën zoals multipel myeloom, systemische lupus erythematosus, bacteriële endocarditis, bacteriële meningitis, Macroglobulinemie van Waldenström, onder anderen..
Aan de andere kant is de aanwezigheid van eiwit in de urine te wijten aan de filtratie van albumine door de nieren. Dit is een pathologisch gedrag dat moet worden bestudeerd.
In die zin is de biureet erg handig, omdat het de aanwezigheid van eiwitten in serum, plasma, urine en vele andere monsters kan kwantificeren..
Zelfs Biureet kan worden gebruikt om de aanwezigheid en concentratie van eiwitten in slecht onderzochte monsters of monsters met onbekende samenstelling te onderzoeken. Daarom wordt het veel gebruikt in het onderzoeksgebied.
De biureet-test is gebaseerd op het detecteren van peptidebindingen. De test vindt plaats in een alkalisch medium. Het monster moet ten minste twee peptidebindingen bevatten om een violet-paars complex te kunnen vormen. Het complex wordt gevormd door de vereniging van de bindingen en het koperion.
Artikel index
Het reagens van Biureet is samengesteld uit kaliumhydroxide, koper (II) sulfaat en natrium- en kaliumtartraat. Natriumhydroxide wordt gebruikt om het medium alkalisch te maken, aangezien deze toestand essentieel is om de reactie te laten plaatsvinden.
De stoffen die reageren met eiwitten is koper (II) sulfaat, terwijl natriumtartraat de functie heeft om de vorming van koperhydroxide niet toe te laten, dat neigt te neerslaan en de reactie verstoort..
Als er stoffen met peptidebindingen (polypeptiden of eiwitten) in het monster worden aangetroffen, is de test positief.
Een reactie wordt als positief geïnterpreteerd wanneer de oplossing paars wordt. De kleur wordt geproduceerd door de vorming van een complex tussen ten minste twee peptidebindingen met de CO-NH-groep en de cupri-kationen.
Het violette complex kan op twee manieren worden gevormd: het ene is door het verlies van protonen van de amidegroepen die aan het metaal binden (depronotatie), en het andere door de vereniging van de zuurstof- en stikstofelektronen die vrij zijn en binden met koper..
Deze reactie kan variëren in intensiteit en kleur, afhankelijk van het type eiwit..
De test kan kwalitatief of kwantitatief worden uitgevoerd. In de kwalitatieve vorm wordt het als positief of negatief gerapporteerd. Hoewel de concentratie in kwantitatieve vorm kan worden gemeten met de spectrofotometrische methode.
De reactie wordt gelezen tussen 540-560 nm. De intensiteit van de kleur is recht evenredig met de concentratie van peptidebindingen in het monster..
-Natriumhydroxide (NaOH) 20%
-1% koper (II) sulfaat pentahydraat (CuSO4. 5HtweeOF)
-Gemengd natriumkaliumtartraat-tetrahydraat (KNaC4H.4OF64HtweeOF)
-Het moet gekoeld bewaard worden.
-Doe 100 µl van het te analyseren monster of de standaard in een reageerbuis.
-Voeg 2 ml natriumhydroxide toe.
-Meng heel goed.
-Voeg 5 ml biureet-reagens toe.
-Meng en laat 25 minuten staan bij kamertemperatuur, dek af en bescherm tegen licht.
-Observeer al dan niet de vorming van kleur en meet spectrofotometrisch.
Runderserumalbumine kan als standaard worden gebruikt om de ijkcurve uit te voeren. Er worden verschillende concentraties van gemaakt. Bijvoorbeeld 25, 50, 75, 100, 125 en 150%.
De reactie wordt opgezet met al deze bekende concentraties en de absorptie wordt afgelezen bij een golflengte van 540 nm. Met de gegevens van de bekende concentraties en de absorptiemetingen wordt de ijkcurve gemaakt.
Bij elke bepaling of batch verwerkte monsters wordt aanbevolen om een standaard te monteren. Runderserumalbumine 0,1-2 mg / ml kan als ijkstandaard worden gebruikt..
Metingen worden uitgevoerd op een spectrofotometer bij 540 nm.
Lineariteit wordt bereikt tot een concentratie van 12 g / dl.
Hoewel het niet erg vaak voorkomt, moet worden opgemerkt dat sommige stoffen kunnen interfereren tijdens de uitvoering van deze test. Zo kan de aanwezigheid van ammoniak de kleurvorming remmen.
Evenzo kunnen andere stoffen op dezelfde golflengte absorberen, zoals bepaalde pigmenten..
Aan de andere kant kan interferentie worden gegenereerd wanneer een andere stof dan de peptidebinding een complex vormt met het koper (II) zout. Voorbeeld: sommige koolhydraten en bepaalde lipiden.
Als het te analyseren monster een soort neerslag vertoont, moet het worden gefilterd of gecentrifugeerd voordat de test wordt uitgevoerd..
De test wordt niet beïnvloed door de aanwezigheid van:
-Bilirubine tot een concentratie van 20 mg / dl.
-Hemoglobine tot een concentratie van 750 mg / dl.
-Dextran tot een concentratie van 30 g / l.
-Triglyceriden tot een concentratie van 4000 mg / dl.
-Het is een eenvoudige methode om uit te voeren.
-Het is een economische test.
-Heeft een hoge specificiteit voor eiwitten.
-Weinig storing.
Het heeft een slechte gevoeligheid om kleine hoeveelheden eiwit te detecteren. Het werk van Fuentes en medewerkers bevestigt dat de biureet-testmethode een detectielimiet heeft van 1 mg / ml eiwit en een kwantificeringslimiet van 3 mg / ml..
Ander onderzoek uitgevoerd aan de Universiteit van Amazonia rapporteert echter veel lagere waarden. De detectielimiet die door het onderzoek wordt gerapporteerd, is 0,020 mg / ml en de kwantificeringslimiet is 1,33 mg / ml..
Het biureet-reagens of -test wordt gebruikt voor de bepaling van eiwitten in klinische en niet-klinische monsters in routine- en onderzoekslaboratoria.
Bij veel pathologieën is het belangrijk om de concentratie van totale eiwitten in klinische monsters te bepalen, die hoog of laag kan zijn.
Ze zijn verheven in:
-Multipel myeloom,
-Systemische lupus erythematosus,
-Bacteriële endocarditis,
-Bacteriële meningitis,
Waldenstrom's macroglobulinemie, onder anderen.
Het is verminderd in:
-Nierinsufficiëntie,
-Mensen met ernstige ondervoeding,
-Onder meer patiënten met chronische infecties.
De meest voorkomende klinische monsters zijn serum, plasma en urine. De normale waarde van eiwitten in serum of plasma is 6,0-8,8 gr / dl.
De eiwitconcentratie in de urine bij volwassenen is niet hoger dan 150 mg / 24 uur.
Zuigelingen: < a 0,50 mg
Kinderen van 2 jaar en ouder: index: 0,20 mg
Volwassenen: < 0,2 mg
De biureet-reactie kan worden gebruikt voor veel soorten niet-klinische monsters, zoals zuivelproducten, tegengif of een onbekende stof waarvoor u de aanwezigheid van eiwitten wilt onderzoeken..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.