De seleniet bouillon Het is een selectief vloeibaar kweekmedium. Het is ontworpen door Leifson voor de verrijking van monsters waarbij de aanwezigheid van enteropathogene bacteriën van het geslacht Salmonella wordt vermoed..
Dit medium voldoet aan de eisen van de American Public Health Association (APHA) en wordt daarom geaccepteerd voor het onderzoek naar de aanwezigheid van salmonella in monsters van ontlasting, urine, vloeibaar of vast voedsel, water, onder andere..
De chemische samenstelling bevordert het herstel van deze micro-organismen en remt op zijn beurt de groei van andere. Het is voornamelijk giftig voor de meeste bacteriën die tot de Enterobacteriaceae-familie behoren. Het maakt echter ook het herstel van Shigella-stammen mogelijk en remt de groei van Pseudomonas en Proteus niet..
Het is samengesteld uit watervrij natriumwaterstofseleniet, watervrij natriumfosfaat, peptonen en lactose. Er is ook een variant waaraan cystine wordt toegevoegd, vandaar de naam seleniet-cystinebouillon..
Momenteel heeft het gebruik van seleniet-cystinebouillon de voorkeur, aangezien een hoger percentage Salmonella-herstel wordt verkregen, equivalent aan het percentage dat wordt waargenomen met andere selectieve media voor hetzelfde doel, zoals natriumtetrathionaatbouillon..
Artikel index
De peptonen in de bouillon dienen als voedingsstoffen voor de goede ontwikkeling van micro-organismen. Salmonella-stammen gebruiken peptonen als een bron van stikstof, vitamines en aminozuren.
Lactose is het fermenteerbare koolhydraat, terwijl natriumseleniet de remmende stof is die de groei van grampositieve bacteriën en de meeste bacteriën die in de darmflora aanwezig zijn, stopt, vooral die van de Enterobacteriaceae-familie. Natriumfosfaat is de buffer die de pH van het medium stabiliseert.
In het geval van de selenietbouillonvariant die L-cystine bevat, is deze extra verbinding een reductiemiddel dat de toxiciteit van seleniet minimaliseert en het herstel van salmonella verhoogt..
Als u de componenten van het mengsel heeft, kunt u afwegen:
4 g watervrij natriumwaterstofseleniet.
10 g watervrij natriumfosfaat.
5 gram peptonen.
4 g lactose.
Los de verbindingen op in 1 liter steriel gedestilleerd water. Het kan lichtjes worden verwarmd om volledig op te lossen.
Sommige laboratoria stellen het medium gedurende 10 minuten bloot aan vloeiende stoom om het te steriliseren, aangezien een autoclaaf niet mag worden gebruikt. Als het medium gesteriliseerd is, kan het tot gebruik in de koelkast worden bewaard..
Het kan ook niet-steriel worden bereid en direct 10 tot 15 ml in steriele reageerbuizen worden geserveerd.
Laat het in dat geval rusten en gebruik het onmiddellijk. Omdat het medium niet steriel is, kan het voor later gebruik niet in de koelkast worden bewaard..
Als het commerciële medium beschikbaar is, weeg dan 23 g van het gedehydrateerde medium af en los het op in een liter steriel gedestilleerd water. Verhit kort om het oplossen te beëindigen. Niet autoclaveren. Dien 10 of 15 ml aseptisch toe in steriele reageerbuizen.
De uiteindelijke pH van het medium moet 7,0 ± 0,2 zijn.
Opgemerkt moet worden dat de kleur van het gedehydrateerde medium beige is en dat de bereiding licht en doorschijnend amber is..
Het bevat dezelfde verbindingen als selenietbouillon, maar er wordt 10 mg cystine toegevoegd. De rest van de procedure is precies hetzelfde als hierboven beschreven.
Dit medium is speciaal voor gebruik in epidemiologische onderzoeken, in gevallen waarin de ziekte zich niet in het acute stadium bevindt, asymptomatische patiënten of gezonde dragers.
Isolatie van het geslacht Salmonella is over het algemeen moeilijk, aangezien het normaal gesproken slechts slecht verontreinigende monsters zijn. Omdat het in enkele hoeveelheden is, wordt het gemakkelijk overlapt door de groei van andere bacteriële geslachten die in grotere hoeveelheden worden aangetroffen..
Aan de andere kant wordt de grondstof waarmee bewerkte voedingsmiddelen worden gemaakt vaak blootgesteld aan onder meer hitte, uitdrogingsprocessen, het gebruik van ontsmettingsmiddelen, straling en conserveermiddelen..
Daarom worden de salmonella's die in de grondstof aanwezig zijn, misbruikt door het product te onderwerpen aan de bovengenoemde industriële processen. Evenzo kunnen in het geval van klinische monsters, zoals uitwerpselen, de stammen zwak zijn als ze afkomstig zijn van patiënten die zijn behandeld met antibiotica..
Daarom moet elk monster waarin de aanwezigheid van salmonella wordt vermoed, vooraf worden verrijkt met lactosebouillon en vervolgens worden verrijkt met selenietbouillon om het herstel ervan in selectieve media te optimaliseren, zoals SS-agar, xylose-agar, lysinedeoxycholaat (XLD), enterisch Onder andere Hektoen-agar (HE) en heldergroene agar.
Neem voor ontlastingsmonsters 1 g monster en suspendeer dit in een buis met 10 tot 15 ml selenietbouillon. Als de ontlasting vloeibaar is, neem dan 1 ml en suspendeer in de bouillon. Voor rectale wattenstaafjes: giet het wattenstaafje in de bouillon.
Neem bij vast voedsel monsters 1 gr en suspendeer in de selenietbouillon.
Meng in vloeibare voedingsmiddelen in gelijke delen met de selenietbouillon in dubbele concentratie.
Voor urinemonsters, centrifugeer, gooi het supernatant weg, neem al het bezinksel op en suspendeer het in de selenietbouillon..
De bouillon wordt gedurende 24 uur geïncubeerd bij 37 ° C. Bacteriële groei blijkt uit troebelheid. Er kan ook een extra buisje per monster worden meegeleverd voor incubatie bij 42 ° C. Vervolgens zaaien van selectieve vaste media uit de selenietbouillon.
Om de steriliteit te beheersen, wordt een selenietbouillon van elke niet-geïnoculeerde batch 24 uur bij 37 ° C geïncubeerd. Er wordt geen troebelheid of kleurverandering van het medium verwacht..
Om de goede werking van het medium te controleren, kunnen bekende stammen worden gebruikt, zoals:
Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 en Proteus mirabilis ATCC 43071.
De verwachte resultaten zijn:
Seleniet-bouillonmedium is giftig voor de menselijke huid, daarom moet direct contact worden vermeden..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.