De GROTE agar Het is een solide, selectief en differentieel kweekmedium. Het is ontworpen om de belangrijkste Candida-soorten te isoleren en te helpen identificeren. De naam BIGGY komt van het acroniem in het Engels Bismuth Glucose Glycine Yeast.
De originele formule is gemaakt door Nickerson, daarom staat dit medium ook bekend als Nickerson-agar. Momenteel is het samengesteld uit gistextract, glycine, dextrose, ammoniumcitraat, bismutcitraat, natriumsulfiet en agar..
BIGGY-agar is ontwikkeld voor de differentiatie van soortencomplex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei en C. kefyr, maar andere soorten groeien ook graag Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum en Saccharomyces cerevisiae.
Het heeft een goede gevoeligheid en specificiteit, maar in vergelijking met andere media met een vergelijkbare functie staat het op de tweede plaats en wordt overtroffen door CHROMagar. Om deze reden geven veel laboratoria de voorkeur aan het laatste, hoewel het veel duurder is..
Het moet duidelijk zijn dat het gebruik van BIGGY Agar, evenals andere soortgelijke middelen, een snelle vermoedelijke identificatie helpt, maar nooit bevestigend. Daarom moeten aanvullende identificatiemethoden beschikbaar zijn; bijv.Vitek 32 en API 20 identificatiesystemen.
Artikel index
BiGGY-agar wordt beschouwd als een gedeeltelijk selectief medium voor de isolatie van gisten, vooral van het geslacht Candida, hoewel andere geslachten kunnen groeien.
Het is ook een differentieel medium omdat, afhankelijk van de betrokken soort, verschillende kenmerken zullen worden waargenomen in termen van uiterlijk, kleur, vorm en grootte. Het wordt beschouwd als een chromogeen medium vanwege de ontwikkeling van verschillende kleuren in de koloniën.
De kleur van de gistkolonies is te wijten aan de aanwezigheid van bismutsulfiet in de agar. Nickerson realiseerde zich dat gisten van het geslacht Candida een extracellulaire reductie van bismutsulfiet uitvoeren, waardoor het wordt omgezet in bismutsulfide (een onoplosbare zwarte stof). Dit resulteert in lichtbruine tot zwarte kolonies..
Deze agar bevat gistextract en dextrose, die de bron zijn van basisvoedingsstoffen en energie voor de ontwikkeling van gist. Glycine is een gistgroeistimulans, terwijl het de groei van bepaalde bacteriën remt.
In dezelfde zin werken ammonium- en bismutcitraat, evenals natriumsulfiet als remmers van bacteriegroei. Agar is het middel dat de medium vaste consistentie geeft.
Weeg 45 g van het gedehydrateerde kweekmedium af en los op in een liter gedestilleerd water. Schud en verwarm het mengsel, kook gedurende 1 minuut tot het volledig is opgelost. Dit kweekmedium is niet autoclaveerbaar.
Bij afkoeling tot ongeveer 45 ° C in een waterbad 20 ml op steriele petrischalen gieten..
De kleur van het gedehydrateerde medium is geelachtig grijs en bereid is een geelachtig witte gel, waarin een licht uitvlokkend neerslag kan worden waargenomen.
De pH moet 6,8 ± 0,2 zijn.
Het bereide medium moet worden bewaard in een koelkast (4 ° C) en beschermd tegen licht. Aangezien het een medium is dat niet kan worden geautoclaveerd, moet het zo snel mogelijk worden gebruikt. Het gebruik ervan wordt binnen 3 dagen na bereiding aanbevolen.
De platen worden 24, 48 en 72 uur bij kamertemperatuur (25 ° C) geïncubeerd en de incubatietijd kan tot 5 dagen worden verlengd..
Elke soort Candida ontwikkelt bepaalde kenmerken die de ene van de andere onderscheiden. De fabrikanten van het medium beschrijven voor elke soort de volgende kenmerken:
-Candida albicans-complex: ontwikkelt zich op deze agar als gladde, ronde, bruine of zwarte kolonies, met een lichte myceliumgrens. Met de uitzondering dat de donkere kleur niet naar het medium diffundeert.
-Candida tropicalis: de kolonies zijn helder, klein, donkerbruin, met een zwart centrum en een lichte myceliumrand. De donkere kleur diffundeert naar het midden, een kenmerk dat typerend is voor deze soort, na 72 uur te zijn geïncubeerd..
-Candida krusei ontwikkelt grote, platte, ruig uitziende kolonies met een bruine tot zwartachtige rand.
-Candida parakrusei: middelgrote kolonies, meestal ruw, plat. De kleur kan variëren van helder donker roodbruin tot licht roodbruin. De grens van de kolonies heeft een uitgebreid, geelachtig mycelium.
-Candida stellatoidea: Vormt middelgrote, platte, donkerbruine, bijna zwarte kolonies. Myceliumontwikkeling is erg schaars.
Een studie uitgevoerd door Yücesoy en Marol in 2003, toonde aan dat CHROMagar-medium een betere gevoeligheid en specificiteit heeft voor de differentiatie en identificatie van verschillende Candida-soorten dan BIGGY-agar..
Voor de steriliteitscontrole worden niet-geïnoculeerde platen 24 tot 48 uur in het donker bij 25 ° C geïncubeerd, er wordt verwacht dat er geen enkele vorm van groei of kleurverandering is..
De ATCC-stammen die worden aanbevolen voor kwaliteitscontrole van het medium zijn:
Candida albicans-complex ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. Bij alle wordt groei verwacht zoals hierboven beschreven..
De volgende soorten kunnen ook worden gebruikt:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 en Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. In de eerste twee wordt totale remming verwacht, maar in het geval van gedeeltelijk groeiende kolonies zal crèmekleurig zijn.
In het geval van S. aureus er wordt verwacht dat het volledig geremd is, maar als ze gedeeltelijk groeien, zijn hun kolonies wit.
Sommige bacteriën kunnen zich in dit medium ontwikkelen en kunnen zelfs donker van kleur worden, wat een Candida-kolonie simuleert, maar wanneer je een uitstrijkje van de kolonie maakt en deze onder een microscoop bekijkt, kan het gemakkelijk worden weggegooid..
Tabel: kenmerken van de kolonies van sommige gisten op BIGGY-agar volgens het werk van Yücesoy M en Marol S.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.