De chocolade agar Het is een solide, verrijkt, niet-selectief en niet-differentieel kweekmedium. Het wordt voornamelijk gebruikt voor het isoleren van veeleisende micro-organismen vanuit voedingsoogpunt, hoewel elk type bacterie erin kan groeien..
Dat is de reden waarom het nut ervan toeneemt, vooral bij het zaaien van monsters die normaal gesproken steriel zijn, zoals CSF en gewrichtsvloeistof. Hoewel het ook is opgenomen in de gekozen middelen voor het zaaien van polymicrobiële monsters, is in deze gevallen de toevoeging van antibiotica die de gelijktijdige flora remmen noodzakelijk..
Dit medium heeft een karakteristieke bruine kleur die erg lijkt op chocolade, vandaar de naam. De bereiding lijkt sterk op die van bloedagar, alleen in dit geval moet het bloed worden verwarmd om de rode bloedcellen te laten afbreken..
De bereiding ervan is, net als bloedagar, erg delicaat, omdat het gemakkelijk kan worden besmet. Om deze reden geven veel laboratoria de voorkeur aan dit medium dat al is voorbereid door commerciële bedrijven die de kwaliteit ervan garanderen..
Artikel index
Dit medium is samengesteld uit een voedingsrijke agarbasis en verwarmd bloed. De hemolyse van rode bloedcellen levert factor X (hemine) en factor V (NAD) op, die nodig zijn voor de groei van sommige micro-organismen, zoals het geslacht Haemophilus. Het is ook erg handig om te isoleren Neisserias sp.
Net als bloedagar kunnen verschillende media worden gebruikt als basisagar, afhankelijk van de behoefte. Tot de gebruikte media behoren hersenhartinfusie en trypticase-soja-agar, hoewel de meest aanbevolen agar van Columbia, Müeller Hinton, GC-agar en Thayer Martin-agar zijn..
Sommige varianten van chocolade-agar bevatten een in de handel verkrijgbaar versterkt supplement genaamd Isovitalex of Polivitex..
Deze supplementen bevatten vitamine B12, L-glutamine, adenine, guanine hydrochloride, p-aminobenzoëzuur, nicotinamide adenine dinucleotide (NAD), thiamine pyrofosfaat, ijzer nitraat, thiamine hydrochloride, cysteïne hydrochloride, L-cystine en glucose.
Het is belangrijk op te merken dat chocolade-agar meer verrijkt is dan bloedagar, maar het is niet mogelijk om hemolysepatronen waar te nemen..
Dit medium bevat pancreasvertering van caseïne en hart, maagvertering van vlees, natriumchloride, agar, gistextract en maïszetmeel. Het is ook rijk aan vitamines, mineralen en essentiële aminozuren.
Deze verwarmde bloedbasis is ideaal voor het isoleren van bacteriën van het geslacht Neisseria. Als daarentegen een supplement voor Brucella aan het medium wordt toegevoegd, kan het bovengenoemde micro-organisme worden geïsoleerd. Resultaten worden verbeterd met paardenbloed.
Dit medium bevat peptonen, maizena, monobasische en dibasische buffers, natriumchloride en agar..
De meeste commercieel bereide chocolade-agar-presentaties worden geleverd met deze basis en bevatten geen verwarmd bloed, maar in plaats daarvan een synthetisch mengsel van hemine en een chemisch supplement van groeifactoren, vitamines, mineralen, aminozuren, factor V en glucose..
Het wordt gebruikt om antimicrobiële gevoeligheidstesten uit te voeren van veeleisende micro-organismen, zoals Streptococcus pneumoniae met 5% verwarmd rambloed.
Het wordt ook gebruikt voor de primaire isolatie van Neisserias en Haemophilus, maar in het specifieke geval van de isolatie van Haemophilus Het gebruik van paardenbloed heeft de voorkeur, aangezien het een rijke bron van factor X en V is.
Aan de andere kant, als het te zaaien monster afkomstig is uit een niet-steriel gebied, wordt de toevoeging van antibiotica aanbevolen om de normale flora van het gebied te remmen..
Voorbeeld voor respiratoire monsters waarbij de aanwezigheid van bacteriën van het geslacht wordt vermoed Haemophilus Bacitracin wordt gebruikt om de groei van Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus en saprofytische Neisserias.
In het geval van genitale chancre-monsters, waarvan wordt vermoed Haemophilus ducreyi, Een chocolade-agar die als volgt is bereid, is met succes gebruikt: Müeller-Hinton-agar met 5% gechocolateerd paardenbloed, 1% Isovitalex-verrijking en 3 µg / ml vancomycine.
Dit medium is speciaal voor het isoleren van Neisseria gonorrhoeae. Het moet antibiotica bevatten om de bijbehorende flora te remmen. Lamsbloed wordt gebruikt.
U zou de indicaties moeten zien voor de bereiding van de te gebruiken basisagar. Ze bevinden zich op de achterkant van de container met het gedehydrateerde medium. Ze beschrijven over het algemeen hoeveel u moet wegen om een liter kweekmedium te bereiden.
In het laboratorium kan precies de benodigde hoeveelheid worden bereid, het kan meer of minder zijn dan een liter.
Een regel van drie wordt gebruikt om te berekenen hoeveel er moet worden gewogen om het gewenste volume te bereiden. Voorbeeld:
Als het voor 1 liter nodig is om 40 g te wegen en het laboratorium 800 ml nodig heeft, wordt er gezegd:
1000 ml -40 gr
800 ml - X
De formule is als volgt:
X = 32 gr (af te wegen hoeveelheid voor 800 ml).
De benodigde hoeveelheid wordt afgewogen en met het water in een kolf gedaan.
Verhit op middelhoog vuur en meng voorzichtig met draaiende bewegingen tot het gedehydrateerde medium volledig is opgelost, laat het 1 minuut koken..
De kolf wordt in de autoclaaf geplaatst om het medium 20 minuten bij 121 ° C te steriliseren..
Bij het verlaten van de autoclaaf, laat het rusten tot de temperatuur van het medium ongeveer tussen 56 en 70 ° C is om het bloed te plaatsen en meng tot het medium bruin wordt..
Als u supplementen toevoegt, is dit het moment om het te doen. Meng vervolgens en serveer 20 ml in elke steriele petrischaal.
De hele procedure moet worden uitgevoerd in een afzuigkap met laminaire stroming of rond de bunsenbrander..
Laat staan tot het stevig is en bewaar ondersteboven in de koelkast.
Het basismedium wordt bereid zoals hierboven beschreven, het commercieel verkregen gedehydrateerde hemoglobine wordt opgelost en gesteriliseerd in de autoclaaf..
Beide oplossingen mogen afkoelen tot 50 ° C, worden samengevoegd en het supplement wordt toegevoegd. Meng onder aseptische omstandigheden en serveer in steriele petrischalen..
Het is belangrijk dat het bloed op de aangegeven temperatuur wordt geplaatst, omdat het ideaal is om de rode bloedcellen te lyseren en tegelijkertijd factor V te behouden, die temperatuurgevoelig is..
Er mogen geen luchtbellen op het oppervlak van de agar achterblijven. Van elke batch van 100 platen moeten een of twee platen gedurende 24 uur in de oven bij 37 ° C worden geïncubeerd om hun steriliteit te controleren..
Voor het beste resultaat dient chocolade-agar kort na bereiding te worden gebruikt..
Controlebacteriestammen moeten in het laboratorium worden bewaard om de werkzaamheid van het verse medium voor de groei van de belangrijkste veeleisende micro-organismen van klinisch belang te beoordelen..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.