De Czapek-agar (CZA) is een selectief vast kweekmedium dat speciaal is ontworpen voor de kweek van saprofytische bacteriën en schimmels. Het werd gemaakt door de botanicus Friedrich Johann Franz Czapek, van Poolse afkomst, en de Amerikaanse chemicus Arthur Wayland Dox; Om deze reden wordt deze agar ook wel Czapek-Dox-medium genoemd..
Het oorspronkelijke medium was vloeibaar, maar later werd agar toegevoegd om er een vast medium van te maken. Czapek-medium is samengesteld uit natriumnitraat, bipotassium fosfaat, magnesiumsulfaat, kaliumchloride, ferrosulfaat, sucrose, agar en gedestilleerd water..
De pH van Czapek-agar is 7,3, maar er is een variant waaraan 10% melkzuur wordt toegevoegd, waarvan de pH op 3,5 blijft. Dit zure medium wordt gebruikt voor de kweek van acidofiele micro-organismen.
Aan de andere kant veranderden sommige commerciële huizen de samenstelling van Czapek-agar door magnesiumsulfaat en bipaliumfosfaat te veranderen door glycerofosfaat; deze modificatie voorkomt de vorming van het magnesiumfosfaatprecipitaat dat wordt waargenomen met de conventionele formule. Evenzo is er nog een variant waaraan gistextract wordt toegevoegd.
Ten slotte wordt Czapek-agar aanbevolen door de American Public Health Association APHA voor de studie van Actinomycetes sp. Aspergillus sp. Paecilomyces sp Y Penicillium sp. Deze soorten worden gekenmerkt door omgevingsmicro-organismen en opportunistische pathogenen..
Artikel index
Dit medium bevat sucrose; Dit koolhydraat dient als een bron van koolstof, terwijl natriumnitraat de bron is van stikstof, maar in tegenstelling tot andere media is de geleverde stikstof anorganisch..
Om deze reden wordt het Czapek-medium als selectief beschouwd, omdat alleen micro-organismen die anorganische verbindingen als enige stikstofbron kunnen gebruiken, kunnen groeien..
Als regulator van de osmolariteit van het medium is bipaliumfosfaat. Magnesiumsulfaat, kaliumchloride en ferrosulfaat van hun kant leveren essentiële mineralen voor de groei van saprofytische (vrijlevende) micro-organismen. Met deze formule wordt een neerslag van magnesiumfosfaat gevormd.
Ten slotte is agar-agar de verbinding die de vaste consistentie aan het medium geeft en water is het oplosmiddel voor alle componenten..
Met de gemodificeerde Czapek-agarformule is er geen neerslagvorming en verbetert het de groeiprestaties van sommige schimmels.
De extreme zuurgraad van Acid Czapek Agar maakt het een selectiever medium, waardoor alleen de groei van acidofiele micro-organismen mogelijk is die anorganische stikstof kunnen gebruiken. Terwijl Czapek-gistagar de prestaties van bepaalde paddenstoelen verbetert.
Weeg 49 g van het gedehydrateerde kweekmedium af en los op in gedestilleerd water. Pas hitte toe tot het kookt. Schud het mengsel regelmatig totdat het volledig is opgelost..
Verdeel het opgeloste mengsel in buisjes en autoclaaf gedurende 15 minuten bij 121 ° C. Bij het verwijderen uit de autoclaaf, homogeniseer alvorens de buisjes neer te leggen en laat stollen.
Autoclaaf het opgeloste mengsel 15 minuten bij 121 ° C en laat het afkoelen tot 50 ° C, homogeniseer en giet 20 ml in steriele petrischalen. Laten stollen, omkeren en tot gebruik in de koelkast bewaren.
De pH moet 7,3 ± 0,2 zijn. De kleur van het gedehydrateerde medium is wit en het bereide medium is licht amberkleurig, enigszins troebel door de aanwezigheid van een uitvlokkend neerslag..
Bereid zoals reeds beschreven, maar voeg 10 ml steriel 10% melkzuur toe voor elke liter bereid medium. Het gemodificeerde Czapek-medium moet op pH 3,5 ± 0,2 blijven.
Weeg 45,4 g van het gedehydrateerde medium af en los op in 1 liter water. De rest van de voorbereiding is hetzelfde als hierboven beschreven. De kleur van het gedehydrateerde medium is wit en het bereide medium is witachtig. De uiteindelijke pH van het medium is 6,8 ± 0,2.
Ook wel Czapek Yeast Extract Agar (CYA) genoemd. Bevat de elementen van klassieke Czapek-agar plus gistextract.
Het Czapek-medium wordt gebruikt om te zoeken naar saprofytische micro-organismen in onder meer bodemmonsters, groenten, granen, lucht, insecten..
Czapek-agar bij zure pH wordt gebruikt voor de groei van acidofiele micro-organismen, terwijl gemodificeerde Czapek-agar vooral nuttig is voor de vorming van chlamydosporen in soorten van het complex. Candida albicans.
Ten slotte is Czapek-gistagar erg bruikbaar voor het isoleren van Aspergillus en Penicillium..
Om actinomyceten in de grond te zoeken, gaat u als volgt te werk: het monster wordt 30 minuten behandeld met fenolwater en vervolgens wordt 1 ml van de suspensie op Czapek-agar gezaaid. Incubeer gedurende 5 tot 7 dagen bij 28 ° C.
Voor groente-, graan- en insectenmonsters worden ze direct op de agar geplaatst. Je kunt ook verdunningen maken en 0,1 ml op het oppervlak van de agar zaaien..
Voor het zaaien wordt een rechte lus of naald gebruikt, deze wordt geïmpregneerd met het wattenstaafje en de agar wordt geënt door een punctie te maken totdat deze de bodem van de plaat raakt. Incubeer gedurende 24 uur bij 28 ° C en onderzoek onder een microscoop boven en onder de plaat of er zich chlamydosporen hebben gevormd..
De incubatietemperatuur en -tijd variëren afhankelijk van het type micro-organisme dat moet worden geïsoleerd. Platen worden over het algemeen één tot twee weken geïncubeerd bij een temperatuurbereik van 20 tot 25 ° C..
Er zijn echter specifieke voorwaarden voor sommige soorten. De meeste soorten van het geslacht Aspergillus hebben bijvoorbeeld een optimale groei bij 30 ° C; Echter A. fumigatus groeit bij 50 ° C.
Wat betreft de incubatietijd is een of twee weken echter normaal Candida albicans kan zich ontwikkelen in 24 tot 48 uur bij 25 ° C.
Het ontwikkelt zich in 12 dagen incubatie bij 27 ° C. Hun kolonies zijn klein (25 mm).
De kolonies hebben een fluweelachtig uiterlijk, met een gedefinieerde witte rand en in het midden heeft het een blauwgroene tint die grijs wordt naarmate het ouder wordt. De achterkant van de kolonie is oranje, waardoor het midden van dezelfde kleur komt vanwege de productie van pigment.
Ontwikkelt zich met wit tot geel mycelium en zwarte sporen.
Er ontstaan crèmekleurige lichtbeige kolonies. In gemodificeerde Czapek-agar vormt chlamydosporen.
Een donkergroen mycelium ontwikkelt zich in 7 dagen bij 25 ° C.
Om de kwaliteit van het kweekmedium te beoordelen, kunnen gecertificeerde controlestammen worden gezaaid, zoals: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.
Aspergillus niger ontwikkelt wit tot geel mycelium en zwarte sporen in ongeveer 5 dagen, terwijl Candida albicans het zal een bevredigende groei hebben in 24 uur incubatie bij 25 ° C; de kolonies zijn crèmekleurig.
Sommige onderzoeken hebben aangetoond dat voor het herstel van actinomyceten de agar met de beste opbrengst aardappeldextrose-agar is, waarbij Czapek-agar op de tweede plaats komt, maar voor het herstel van Aspergillus en Penicillium is Czapek-agar degene die het hoogste herstelpercentage oplevert..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.