De lactose bouillon is een vloeibaar, niet-selectief kweekmedium dat voornamelijk wordt gebruikt als voorverrijkingsmedium bij de isolatie van Salmonella-stammen uit de microbiologische analyse die wordt uitgevoerd op bewerkte voedingsmiddelen, zuivelproducten of water. Dit wordt aanbevolen door de International Commission on Microbiological Specificaties for Foods (ICMPF).
Het medium bevat enzymatische vertering van gelatine, vleesextract en lactose, stoffen die nodig zijn voor bacteriegroei. Bovendien is lactose een fermenteerbaar koolhydraat, daarom zijn sommige colibacteriën in staat om het af te breken bij de productie van gas..
Om deze reden wordt lactosebouillon aanbevolen door de American Public Health Association (APHA) voor de vermoedelijke studie van totale en fecale colibacteriën, waardoor het wordt gekwalificeerd als een uitstekend alternatief om tryptose-laurylsulfaatbouillon te vervangen in de standaardtechniek van het meest waarschijnlijke nummer ( MPN).), Gebruikt voor de microbiologische analyse van voedsel-, melk- en oppervlakte-, ondergrondse, recreatieve, huishoudelijke en industriële afvalwatermonsters.
Artikel index
Voor de microbiologische analyse van sommige monsters is de voorverrijkingsstap essentieel om een specifiek micro-organisme te kunnen terugwinnen dat zich in zeer kleine hoeveelheden of in ongunstige omstandigheden kan bevinden die de levensvatbaarheid ervan schenden of minimaliseren..
Dit is het geval bij gedroogde en bewerkte voedingsmiddelen, die mogelijk besmet zijn met Salmonellas sp. In deze gevallen, als de bacteriën aanwezig zijn, zijn ze tijdens het productieproces van het product fysiek en chemisch misbruikt..
Op een zodanige manier dat micro-organismen worden blootgesteld aan ongunstige factoren zoals uitdroging, blootstelling aan remmende of giftige producten, en de overlap die wordt gegenereerd door de aanwezigheid van onder andere andere bacteriën..
In die zin heeft de lactosebouillon een herstellend effect op de beschadigde structuren van het micro-organisme, waardoor het zich herstelt en zich voortplant, op een zodanige manier dat het kan worden gedetecteerd.
Evenzo heeft de lactosebouillon het vermogen om de remmende stoffen te verdunnen die de levensvatbaarheid ervan kunnen beïnvloeden, waardoor de ontwikkeling ervan mogelijk wordt. Bovendien is de voedingssamenstelling van de lactosebouillon strategisch om de groei van te bevorderen Salmonella sp boven andere micro-organismen.
Voor definitieve identificatie, subcultuur naar andere definitieve kweekmedia.
Aan de andere kant maakt de samenstelling van het medium ook de detectie mogelijk van lactose-fermenterende micro-organismen die gas produceren..
Om een liter lactosebouillon te bereiden, moet 13 gram van het gedehydrateerde medium worden afgewogen en opgelost in 1000 ml gedestilleerd water..
Om het medium in het water op te lossen, kan de oplossing een beetje worden verwarmd, maar niet te veel..
Eenmaal homogeen, wordt de oplossing als volgt bereid: als de bouillon wordt gebruikt om coliformen te zoeken, wordt een rek met reageerbuizen voorbereid, waarin een Durham-fermentatiebuis ondersteboven wordt geplaatst.
De Durham-buis is een zeer belangrijk detail, omdat het de detectie van gasvorming mogelijk maakt, een gegevens van grote waarde bij het zoeken naar coliformen.
Als de buisjes klaar zijn, wordt er 10 ml melkbouillon in gedoseerd, een hoeveelheid die voldoende moet zijn om de hele Durham-buis te bedekken..
Als de lactosebouillon moet worden gebruikt als voorverrijkingsbouillon, is het niet nodig om een Durham-fermentatiebuisje te plaatsen. In dit geval is een grotere hoeveelheid medium nodig (225 ml), die wordt geserveerd in flessen van 500 ml, brede opening en met een hittebestendige schroefdop..
Vervolgens worden de buisjes of kolven 15 minuten geautoclaveerd bij 121 ° C..
Het medium moet op een uiteindelijke pH van 6,9 ± 0,2 bij 25 ° C blijven.
De bouillon wordt tot gebruik in de koelkast bewaard.
Voor gebruik moeten de bouillon op kamertemperatuur worden gebracht.
Aan de andere kant kan de lactosebouillon ook in een dubbele concentratie worden bereid..
Sommige laboratoria voegen broomcresolpurper toe aan de lactosebouillon als pH-indicator, om de buisjes te laten zien waar lactosefermentatie heeft plaatsgevonden als gevolg van de kleurverandering. In dit geval krijgt de bouillon een paarse kleur en als er gisting is, wordt deze geel.
In microbiologische laboratoria wordt lactosebouillon veel gebruikt omdat het een relatief goedkoop medium is dat betrouwbare en snelle resultaten biedt (24-48 uur)..
Het kan worden gebruikt voor de analyse van totale en fecale coliformen in voedsel en water of als pre-verrijkingsbouillon voor Salmonella.
Voorverrijking is een stap voorafgaand aan de verrijking van het monster, waardoor het herstel van bacteriën van het geslacht Salmonella in bewerkte voedingsmiddelen aanzienlijk wordt verbeterd..
Om dit te doen, wordt het monster van het vaste voedsel (25 gram) of vloeistof (25 ml) gezaaid in 225 ml lactosebouillon, geïncubeerd gedurende 24 tot 48 uur. Vervolgens wordt het ondergekweekt in een verrijkt medium zoals selenietcystinebouillon of tetrathionaatbouillon. Ga dan verder met XLD- en SS-selectieve media.
Het is een uitstekend medium als indicator van fecale besmetting.
Daarom is lactose-bouillon ideaal voor de vermoedelijke fase van de studie van coliformen volgens de meest waarschijnlijke nummer-methode..
Voor monsters waarin een grote hoeveelheid colibacteriën wordt vermoed, wordt een kleinere hoeveelheid ervan geïnoculeerd (1 ml), terwijl voor monsters waarin een kleinere hoeveelheid colibacteriën wordt vermoed, een groter volume monsters (10 ml) wordt geïnoculeerd. ..
Voor de analyse worden verdunningen gemaakt 10-1, 10-twee, 10-3, het vormen van een batterij van 3-5 buizen voor elke gebruikte concentratie.
Van elke verdunning wordt hetzelfde volume in de lactosebouillon gezaaid.
De buisjes worden 24 uur geïncubeerd. Negatieve bouillons worden nog eens 24 uur geïncubeerd.
De interpretatie van de resultaten gebeurt door twee kenmerken te observeren: de eerste is de aan- of afwezigheid van troebelheid en aangezien dit medium geen pH-indicator bevat, zal er geen kleurverandering optreden..
De tweede is de productie van gas of niet. Gas is gemakkelijk te zien in de Durham-buis door het verschijnen van een of meer luchtbellen binnenin..
Het wordt als positief beschouwd als beide kenmerken worden waargenomen, dat wil zeggen troebelheid bij gasproductie. Positieve buisjes moeten opnieuw worden gezaaid in bevestigingsmedia (Brilliant Green Bile 2% bouillon en EC-bouillon).
- Bij het bereiden van het medium is het belangrijk om niet te vergeten de Durhams-buisjes te plaatsen als het doel van de buis is om coliformen te bestuderen..
- Oververhit het medium niet voordat u het steriliseert.
- Verdeel in reageerbuizen vóór sterilisatie, nooit erna.
- Niet gebruiken als het medium ouder is dan 3 maanden..
- Niet gebruiken als u enige verandering in de gebruikelijke kenmerken van het medium waarneemt.
- Test bij het bereiden van een batch lactosebouillon de kwaliteit van de batch door stammen te planten die bekend staan als Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii Y Klebsiella pneumoniae. Ze groeien erg goed, met gasproductie (positieve controle).
- Het kan ook bevatten Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium of Enterococcus faecalis, die goed groeien, maar zonder gasproductie (negatieve controle).
- Opgemerkt moet worden dat de oorspronkelijke kleur van het gedehydrateerde medium beige is en die van het bereide medium erg licht en transparant geel is. Als een verandering in kleur of uiterlijk wordt waargenomen, kan deze verslechteren..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.