De ureum bouillon Het is een vloeibaar kweekmedium dat wordt gebruikt om de aanwezigheid van het enzym urease in bepaalde micro-organismen aan te tonen. Urease is een microbieel enzym dat op een constitutieve manier wordt geproduceerd, dat wil zeggen dat het wordt gesynthetiseerd ongeacht of het substraat waarop het werkt al dan niet aanwezig is..
De functie van urease is gerelateerd aan de afbraak van organische verbindingen. Niet alle micro-organismen zijn in staat dit enzym te synthetiseren, daarom maakt de bepaling in het laboratorium het mogelijk om bepaalde bacteriestammen te identificeren en zelfs onderscheid te maken tussen soorten van hetzelfde geslacht..
Er zijn twee soorten ureumtesten: Stuart en Christensen. Ze verschillen in samenstelling en gevoeligheid. De eerste is speciaal om te laten zien dat een grote hoeveelheid urease wordt geproduceerd door soorten van het geslacht Proteus.
De tweede is gevoeliger en kan kleine hoeveelheden urease detecteren die laat door andere bacteriële geslachten worden gegenereerd, zoals Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter en Mycobacterium.
Stuart's ureumbouillon is samengesteld uit ureum, natriumchloride, dikaliumfosfaat, monokaliumfosfaat, gistextract, fenolrood en gedestilleerd water.
Ondertussen is Christensen's ureumbouillon of agar samengesteld uit peptonen, natriumchloride, monokaliumfosfaat, glucose, ureum, fenolrood, gedestilleerd water en agar-agar. Dat laatste alleen als het het vaste medium is.
Artikel index
Het enzym urease hydrolyseert ureum om kooldioxide, water en twee ammoniakmoleculen te vormen. Deze verbindingen reageren om het eindproduct te vormen dat ammoniumcarbonaat wordt genoemd..
Stuart's Urea Broth is meer gebufferd met een pH van 6,8. Daarom moet het micro-organisme grote hoeveelheden ammoniak kunnen vormen om fenolrood te kleuren. De pH moet boven de 8 komen.
Daarom is Stuart's ureumbouillon selectief voor Proteus-soorten, met positieve resultaten binnen 24 tot 48 uur na incubatie, en is het niet effectief voor bacteriën die lage hoeveelheden urease produceren of die ureum langzaam hydrolyseren..
Dit komt omdat Proteus-soorten ureum als stikstofbron kunnen gebruiken. In plaats daarvan hebben andere urease-producerende bacteriën een extra bron nodig.
Pérez et al. (2002) stelden vast dat de ureumbouillon van Stuart net zo efficiënt was als de ureumagar van Christensen, om urease te bepalen in giststammen van de geslachten Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon en Saccharomyces.
De auteurs van het onderzoek beweren 100% overeenstemming te hebben bereikt met beide media (Stuart en Christensen) bij het incuberen gedurende 24 en 48 uur; met de uitzondering dat de soorten die de media in een sterke roze-fuchsia kleur wisten om te zetten als positief werden beschouwd.
Deze verduidelijking is nodig, aangezien Lodder (1970) stelde dat bijna alle gisten erin slagen de afschuining van Christensen's ureumagar lichtroze te kleuren. Dit komt door het feit dat ze ureum in zeer kleine hoeveelheden kunnen hydrolyseren, en door de vorming van aminen door de oxidatieve decarboxylering van de aminozuren op het oppervlak. Dit moet niet als positief worden opgevat.
De ureumbouillon of agar van Christensen is minder gebufferd en kan kleine hoeveelheden ammoniak detecteren. Verder is dit medium verrijkt met peptonen en glucose. Deze verbindingen zorgen ervoor dat andere urease-producerende micro-organismen groeien die niet groeien in Stuart-bouillon..
Evenzo biedt de Christensen-ureumtest snellere resultaten, vooral voor Proteus, die sterk positief kan zijn in slechts 30 minuten als minimale tijd en tot 6 uur als maximale tijd.
De rest van de urease-producerende micro-organismen slagen erin om de kleur van het medium lichtjes te veranderen na 6 uur, en sterk na 24, 48, 72 uur of meer, en zelfs sommige stammen kunnen zwakke reacties geven na 5 of 6 dagen..
Het medium is oorspronkelijk geeloranje van kleur en bij een positieve reactie zal de kleur van het medium veranderen in roze-fuchsia. De intensiteit van de kleur is recht evenredig met de hoeveelheid geproduceerde ammoniak.
Een negatieve reactie zal het medium met de oorspronkelijke kleur verlaten, met uitzondering van gisten, die lichtroze kunnen worden op Christensen's ureumagarmedium..
Weeg de benodigde grammen af volgens de aanwijzingen van het handelsbedrijf. Oplossen in bij voorkeur steriel gedestilleerd water. Gebruik geen warmte om op te lossen, omdat ureum gevoelig is voor warmte.
De membraanfiltratiemethode wordt gebruikt om te steriliseren. Hiervoor wordt een Millipore-filter met poriën van 0,45 µdiameter gebruikt. Gebruik geen autoclaaf. Nadat de oplossing is gefilterd, wordt deze in steriele buisjes verdeeld. Om betrouwbare resultaten te verkrijgen, moet het worden overgebracht tussen 1,5 ml als minimale hoeveelheid en 3 ml als maximale hoeveelheid per buisje..
Voor gebruik in de koelkast bewaren en opwarmen..
Als de filtratiemethode niet beschikbaar is, moet het medium onmiddellijk worden gebruikt voor betrouwbare resultaten..
Een andere manier om de ureumbouillon van Stuart te bereiden, is als volgt:
Sommige commerciële huizen verkopen het basismedium voor de ureumtest, exclusief ureum..
De door het handelsbedrijf aangegeven hoeveelheid wordt gewogen. Het wordt opgelost in gedestilleerd water en gedurende 15 minuten gesteriliseerd in de autoclaaf bij 121 ° C. Laat het een beetje rusten en voeg als het medium warm is 100 ml van een ureumoplossing toe die is bereid met 20% en gesteriliseerd door middel van filtratie..
Het wordt verdeeld in steriele buisjes, zoals eerder beschreven.
Weeg 29 g gedehydrateerde ureum af en los op in 100 ml gedestilleerd water. Gebruik de filtratiemethode om te steriliseren. Niet autoclaveren.
Los 24 g van de gedehydrateerde basisagar op in 950 ml gedestilleerd water. Steriliseer gedurende 15 minuten in de autoclaaf bij 121 ° C. Laat staan tot het een temperatuur van 50 ° C heeft bereikt en voeg het eerder bereide ureum aseptisch toe.
Giet 4 tot 5 ml in steriele buisjes en kantel tot ze vast zijn. Er moet een lange fluitbek zijn.
Dit medium kan ook in vloeibare vorm worden bereid.
De ureumtest is buitengewoon effectief om het geslacht Proteus te onderscheiden van andere geslachten in de familie Enterobacteriaceae, gezien de snelle reactie van Proteus..
Met behulp van de Christensen-samenstelling helpt de test om onderscheid te maken tussen soorten van hetzelfde geslacht. Bijvoorbeeld, S. haemolyticus en S. warneri sAan Stafylokokken coagulase-negatief en beta-hemolytisch, maar daarin verschillen ze S. haemolyticus is ureum negatief en S. warneri is ureum positief.
Anderzijds gebruikte McNulty met succes de 2% ureumbouillon van Christensen om de aanwezigheid van te bestuderen Helicobacter pylori in biopsiemonsters genomen uit het maagslijmvlies (antrale regio).
De aanwezigheid van H. pylori het wordt bewezen door een positieve ureumtest. De duur van het observeren van de resultaten is recht evenredig met de hoeveelheid aanwezige micro-organismen.
Zoals te zien is, is het een eenvoudige methode voor de diagnose van Helicobacter pylori in maagbiopsieën.
Ten slotte is deze test ook nuttig om soorten van de geslachten Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus en Mycobacteria te differentiëren..
Beide methoden vereisen een sterk microbieel inoculum om de resultaten te optimaliseren. Bacteriekolonies worden bij voorkeur genomen uit bloedagar en gisten uit Sabouraud-agar, op enkele uitzonderingen na. Het inoculum wordt geëmulgeerd in het vloeibare medium.
Voor de ureumbouillon van Stuart, incubeer je 24 tot 48 uur bij 37 ° C, wetende dat je alleen naar stammen van het geslacht Proteus zoekt als het om een bacterie gaat. Voor gisten kan het worden geïncubeerd bij 37 ° C of bij kamertemperatuur gedurende 24 tot 48 uur incubatie.
In het geval van de ureumbouillon van Christensen wordt deze 24 uur bij 37 ° C geïncubeerd. Als de test negatief is, kan deze maximaal 6 dagen worden geïncubeerd. Als de test vóór 6 uur positief is, geeft dit aan dat het een stam is van het geslacht Proteus.
In het geval van de ureumagar van Christensen wordt de afschuining van de agar sterk geïnoculeerd, zonder te prikken. De bouillon wordt op dezelfde manier geïncubeerd en geïnterpreteerd.
Beheers stammen zoals Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 en Salmonella typhimurium. De eerste twee zouden positieve resultaten moeten opleveren en de laatste twee negatieve resultaten..
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.