De medium OF of glucose fermentatieagar is een halfvaste agar die speciaal is ontworpen voor de studie van het oxidatieve en fermentatieve metabolisme van koolhydraten in een belangrijke groep van andere micro-organismen dan Enterobacteriaceae, de zogenaamde niet-enterische gramnegatieve bacillen.
Het is gemaakt door Hugh en Leifson; deze onderzoekers realiseerden zich dat conventionele methoden om de zuurproductie uit koolhydraten te bestuderen niet geschikt waren voor deze specifieke groep bacteriën.
Dit komt doordat niet-enterische gramnegatieve staven over het algemeen lage hoeveelheden zuren produceren, in tegenstelling tot Enterobacteriaceae..
In die zin heeft het OF-medium speciale eigenschappen die de kleine hoeveelheden gevormd zuur kunnen detecteren, zowel via oxidatieve als fermentatieve routes. Deze verschillen zijn gerelateerd aan de hoeveelheid peptonen, koolhydraten en agar..
Dit medium bevat minder peptonen en een hogere concentratie koolhydraten, waardoor de producten die het medium alkaliseren als gevolg van het eiwitmetabolisme verminderen en de productie van zuren door het gebruik van koolhydraten toeneemt..
Aan de andere kant bevordert de afname van de hoeveelheid agar de verspreiding van het geproduceerde zuur door het medium, naast het feit dat we de beweeglijkheid kunnen observeren..
OF-medium is samengesteld uit pepton, natriumchloride, broomthymolblauw, dikaliumfosfaat, agar en een koolhydraat. De meest voorkomende koolhydraat is glucose, maar andere kunnen worden gebruikt op basis van degene die u wilt bestuderen, zoals lactose, maltose, xylose, onder anderen..
Artikel index
Zoals elk kweekmedium moet OF-medium voedingsstoffen bevatten die de groei van bacteriën garanderen; deze stoffen zijn peptonen.
Koolhydraat van zijn kant levert energie en dient tegelijkertijd om het gedrag van het micro-organisme daartegen te bestuderen, dat wil zeggen dat het de bacteriën in staat stelt te worden geclassificeerd als een oxidatief, fermentatief of niet-saccharolytisch organisme..
OF-medium bevat een 1: 5 pepton / koolhydraatverhouding in tegenstelling tot 2: 1 conventionele media. Dit zorgt ervoor dat de hoeveelheid alkalische aminen gevormd door de afbraak van peptonen de vorming van zwakke zuren niet neutraliseert..
Aan de andere kant bevat het medium natriumchloride en dikaliumfosfaat. Deze verbindingen stabiliseren het medium osmotisch en reguleren respectievelijk de pH. Broomthymolblauw is de pH-indicator, die de kleur van het medium verandert van groen naar geel met de productie van zuur..
Sommige micro-organismen kunnen koolhydraten gebruiken via de oxidatieve of fermentatiewegen, terwijl andere geen van de twee routes gebruiken..
Dit hangt af van de kenmerken van elk micro-organisme. Sommige strikt aërobe micro-organismen kunnen bijvoorbeeld bepaalde koolhydraten oxideren, en facultatieve anaëroben kunnen oxideren en fermenteren afhankelijk van de omgeving om hen heen, terwijl andere koolhydraten niet oxideren of fermenteren (asacarolytisch)..
Ten slotte is er een wijziging van het OF-medium aanbevolen door de CDC die een speciale OF-basis bevat met fenolrood als indicator..
Het glucose-oxidatieproces vereist geen glucose-fosforylering, net als het fermentatieproces. In dit geval wordt de aldehydegroep geoxideerd tot een carboxylgroep, wat resulteert in gluconzuur. Dit wordt op zijn beurt geoxideerd tot 2-ketogluconzuur.
De laatste stapelt zich op of breekt af tot twee moleculen pyrodruivenzuur. Dit systeem vereist de aanwezigheid van zuurstof of een anorganische verbinding als de uiteindelijke elektronenacceptor..
De productie van zuren via deze route is zwakker dan die verkregen via de fermentatieroute.
Om de fermentatie van glucose via een van de beschikbare routes te laten plaatsvinden, moet het eerst worden gefosforyleerd en glucose-6-fosfaat worden..
Glucosefermentatie kan verschillende routes volgen, de belangrijkste is de Embden-Meyerhof-Parnas-route, maar ze kunnen ook de Entner-Doudoroff-route volgen, of de Warburg-Dickens hexose monofosfaatroute, ook wel bekend als de afbraak van pentosen..
De gekozen route hangt af van het enzymsysteem dat het micro-organisme bezit..
Bij de fermentatie van glucose door de Embden-Meyerhof-Parnas-route, wordt het opgesplitst in twee triosemoleculen om vervolgens te worden afgebroken tot verschillende koolstofverbindingen, totdat de vorming van glyceraldehyde-3-fosfaat wordt bereikt. Van daaruit ontstaat een tussenstof, namelijk pyrodruivenzuur..
Van daaruit worden verschillende soorten gemengde zuren gevormd die van soort tot soort kunnen verschillen..
Dit systeem treedt op in afwezigheid van zuurstof en vereist een organische verbinding als de uiteindelijke elektronenacceptor..
Bij de fermentatie van glucose via de Entner-Doudoroff-route wordt glucose-6-fosfaat glucono-ᵼ-lacton-6-fosfaat en van daaruit wordt het geoxideerd tot 6-fosfogluconaat en 2-keto-3-deoxy-6-fosfogluconaat, tot vormen uiteindelijk pyrodruivenzuur. Deze route heeft zuurstof nodig om glycolyse te laten plaatsvinden.
Deze route is een hybride van de vorige 2. Het begint vergelijkbaar met de Entner-Doudoroff-route, maar later wordt glyceraldehyde-3-fosfaat gevormd als een voorloper van pyrodruivenzuur, zoals gebeurt in de Embden-Meyerhof-Parnas-route..
Wegen:
2 g pepton
5 g natriumchloride
10 g D-glucose (of de te bereiden koolhydraten)
0,03 g broomthymolblauw
3 gr agar
0,30 g dikaliumfosfaat
1 liter gedestilleerd water.
Meng alle verbindingen behalve de koolhydraten en los op in 1 liter gedestilleerd water. Verwarm en schud tot het volledig is opgelost.
Voeg bij afkoeling tot 50 ° C 100 ml 10% glucose (gefilterd) toe.
Verdeel 5 ml medium aseptisch in reageerbuizen met katoenen dop en autoclaaf bij 121 ° C, 15 pond druk gedurende 15 minuten.
Laat stollen in een verticale positie.
De pH van het medium moet 7,1 zijn De kleur van het voorbereide medium is groen.
Bewaar in de koelkast.
Het OF-medium is een speciaal medium voor het bepalen van het metabolische gedrag van een micro-organisme ten opzichte van een koolhydraat. Vooral voor degenen die weinig, zwakke of geen zuren vormen.
Voor elk micro-organisme zijn 2 OF-buisjes nodig, beide moeten worden geïnoculeerd met het te bestuderen micro-organisme. De kolonie wordt genomen met een rechte handgreep en er wordt een punctie gemaakt in het midden van de buis zonder de bodem te bereiken; Er kunnen meerdere lekke banden worden gemaakt, zolang er geen interesse is in het observeren van de beweeglijkheid.
Een laag steriele vloeibare petrolatum of steriele gesmolten paraffine (ongeveer 1 tot 2 ml) wordt aan een van de buisjes toegevoegd en wordt geëtiketteerd met de letter "F". De andere buis is origineel gelaten en is gelabeld met de letter "O". Beide buisjes worden bij 35 ° C geïncubeerd en gedurende maximaal 3 tot 4 dagen dagelijks geobserveerd..
Tabel: Classificatie van micro-organismen volgens hun gedrag in open (oxidatieve) en gesloten (fermentatieve) OF-buizen
Het gas wordt waargenomen met de vorming van bellen of verplaatsing van de agar.
Opgemerkt moet worden dat een organisme dat alleen glucose oxideert maar het niet fermenteert, ook geen andere koolhydraten kan fermenteren, het zal het in ieder geval alleen oxideren. Daarom zal in deze situatie de verzegelde buis voor de studie van andere koolhydraten worden weggelaten..
Bovendien is beweeglijkheid te zien in het OF-medium.
Positieve beweeglijkheid: groei die niet beperkt is tot de inoculatiezone. Er is groei naar de zijkanten van de buis.
Negatieve beweeglijkheid: groei alleen in het eerste inoculum.
De volgende soorten kunnen worden gebruikt als kwaliteitscontroles: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa Y Moraxella sp. De verwachte resultaten zijn:
-Sommige micro-organismen kunnen niet groeien in OF-medium. In deze gevallen wordt de test herhaald, maar wordt 2% serum of 0,1% gistextract aan het medium toegevoegd..
-Oxidatiereacties worden vaak alleen dicht bij het oppervlak waargenomen en de rest van het medium kan groen blijven, net zoals het als positief wordt beschouwd.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.