De safranin Het is een meriquinoïde kleurstof, genoemd naar zijn chemische structuur met 2 benzeenringen en 2 quinoïde ringen, waarvan de laatste de rode kleur geven..
Het wordt ook dimethylsafranine of basisch rood 2 genoemd in zijn korte vorm, omdat de wetenschappelijke naam 3,7-diamino-2,8-dimethyl-5-fenyl-fenaziniumchloor-dimethylsafranine is en de chemische formule C is.twintigH.19N4 Cl.
Er is een variant genaamd trimethyl-safranine, maar er is geen significant verschil tussen de twee stoffen.
Safranine is een monochromatische kleurstof en is, afhankelijk van de eigenschappen van de chemische formule, een positief geladen stof. Daarom heeft het een affiniteit voor negatief geladen structuren. Deze structuren worden rood gekleurd.
Deze eigenschap maakt het toepasbaar in vele histologische technieken om verschillende cellulaire structuren te kleuren, zowel in eukaryote als prokaryote organismen..
Safranine wordt gebruikt als contrastkleurstof in belangrijke en bekende technieken voor routinematig gebruik in de bacteriologie. Deze technieken zijn: de Gram-Hucker-kleuring, de Schaeffer Fulton-kleuring voor sporen of het kleuren van onder andere bacteriële capsules..
Artikel index
De kleur van saffraan (een specerij verkregen uit de stempels van de bloem van Crocus sativus) was de inspiratie om deze kleurstof te noemen. Van de term saffraan komt de naam van safranine. Dit komt door de grote gelijkenis tussen de kleur van saffraan en de kleurstof die deze kleurstof geeft..
Safranine wordt verkregen als kristallen of in poeder, beide vormen oplosbaar in water. De safraninekleurstof is reukloos. Vlekken structuren rood. De structuren die safraninekleurstof aantrekken, worden safranofielen genoemd..
Structureel safranine is complex, het heeft twee benzeenringen aan de uiteinden en in het midden bevinden zich de twee quinoïde ringen waar het N-kation wordt aangetroffen.+. Het middelpunt van de structuur is het systeem dat verantwoordelijk is voor de kleur. Vanwege deze eigenschap is deze kleurstof ingedeeld in categorie II..
Safranine wordt gebruikt om verschillende structuren te kleuren. Benadrukt vooral de Kulchitsky-cellen die aanwezig zijn in het maagdarmkanaal, ook wel enterochromaffinecellen genoemd.
Het is in staat om micro-organismen die tot de familie behoren te kleuren Rickettsiaceae. Evenzo wordt het gebruikt in verschillende technieken, zoals de Koster-methode, een gemodificeerde methode die wordt gebruikt voor het kleuren van bacteriën van het geslacht Brucella.
Anderzijds wordt safranine gebruikt bij de Schaeffer Fulton-sporenkleuringstechniek en bij de Gram-Hucker-kleuring. In beide technieken werkt safranine als een contrastkleurstof.
In de eerste krijgen de sporen de kleur van malachietgroen en de rest van de structuren is rood door safranine. In het tweede geval verliezen de gramnegatieve bacteriën de kleur van het violette kristal in de verkleuringstap, daarom is safranine degene die de gramnegatieve bacteriën rood kleurt.
Bovendien wordt safranine in de bacteriologie gebruikt om Brucella-agarmedia te bereiden met een 1: 5000 verdunning van safranine. Dit medium dient om de soort te differentiëren Brucella suis van de rest van de soort. Brucella melitensis Y Brucella abortus ze groeien in deze omgeving maar B. suis wordt geremd.
In de agro-industriële sector is safranine 2,25% gebruikt en 1:10 verdund om stengelmonsters van de suikerrietplant te kleuren.
Deze plant wordt vaak aangetast door de bacteriën Leifsonia xyli subsp. xyli, die het xyleem van de plant beschadigt. De gekleurde stengels worden geëvalueerd om de functie van de xyleemvaten te bepalen..
Een bloed- of weefseluitstrijkje wordt in een bufferoplossing geplaatst (fosfaatbuffer pH 7,6). Het wordt spontaan gedroogd en vervolgens gedurende 3 minuten bedekt met methyleenblauw en tegengekleurd met safranine. Rickettsiae zijn blauw gekleurd, in contrast met de rode achtergrond.
Er wordt een uitstrijkje gemaakt en in de aansteker gevlamd voor fixatie. Vervolgens wordt het gedurende 1 minuut bedekt met een mengsel van 2 delen waterig safranine verzadigd met 3 delen 1 mol / l KOH-oplossing. Het wordt gewassen met gedestilleerd water en tegengekleurd met 1% carbolisch methyleenblauw..
Als het monster bacteriën van het geslacht bevat Brucella deze verschijnen oranje op een blauwe achtergrond.
Een mengsel van bacteriesuspensie wordt gemaakt met Oost-Indische inkt en safranine wordt eraan toegevoegd. Onder de microscoop zal een roodachtige halo worden waargenomen rond elke bacteriële capsule met een zwarte achtergrond..
Met de bacteriesuspensie wordt een uitstrijkje gemaakt. Daarna wordt het gefixeerd om te verwarmen. Het is bedekt met 5% malachietgroen en brandt vaak totdat er dampen vrijkomen. Het proces wordt gedurende 6-10 minuten herhaald. Ten slotte wordt het gewassen met water en gedurende 30 seconden tegengekleurd met 0,5% safranine. Bacillen kleuren rood en sporen groen.
Een uitstrijkje wordt gemaakt met bacteriële suspensie en het wordt verhit. Bedek het objectglaasje gedurende 1 minuut met kristalviolet. Vervolgens wordt lugol gedurende 1 minuut als bijtende oplossing geplaatst. Vervolgens wordt het gebleekt met acetonalcohol en tenslotte gedurende 30 seconden tegengekleurd met safranine..
Grampositieve bacteriën kleuren blauwachtig paars en gramnegatieve bacteriën rood.
Sommige laboratoria zijn gestopt met het gebruik van de Gram-Hucker-techniek om de gemodificeerde Gram-Kopeloff-techniek toe te passen. In het laatste wordt safranine vervangen door basisfuchsine. Dit komt omdat safranine soorten van de geslachten zwak kleurt Legionella, Campylobacter Y Brucella.
Weefselsecties uit het maagdarmkanaal worden gekleurd met zilverchloride. Het wordt vervolgens ontkleurd met natriumthiosulfaat en tenslotte tegengekleurd met safranine.
Kulchitsky-cellen onderscheiden zich door de aanwezigheid van zwartachtig bruine korrels..
Omdat safranine een positieve lading heeft, bindt het zeer goed aan de carboxyl- en sulfaatgroepen van glycosaminoglycanen. Deze maken deel uit van de proteoglycanen waaruit het gewrichtskraakbeen bestaat. In die zin is het bij het kleuren met safranine O mogelijk om vast te stellen of er al dan niet kraakbeenverlies is..
Het verlies van kraakbeenweefsel kan worden gemeten met de Mankin-schaal of ook wel de artrose-schaal genoemd..
De techniek wordt hieronder uitgelegd: het histologische gedeelte wordt ondergedompeld in een bakje met Weigert's ijzerhematoxyline-oplossing, vervolgens door zure alcohol geleid en gewassen met water.
Vervolg het kleurproces door het glaasje onder te dompelen in snelgroen, het wordt gewassen met azijnzuur en nu wordt het ondergedompeld in safranine O. Om het proces te voltooien, wordt het gedehydrateerd met alcoholen in verschillende concentraties in oplopende volgorde. De laatste stap vereist xyleen of xylol om het monster te laten klaren.
De objectglaasjes zijn geconditioneerd met Canadese balsem of iets dergelijks om onder een microscoop te bekijken..
Met deze techniek worden de kernen zwart gekleurd, het bot groen en het kraakbeen waar de proteoglycanen worden aangetroffen rood.
Pérez et al stelden in 2003 een eenvoudige en goedkope techniek voor om macroalgen te verven. De monsters worden bereid in histologische paraffine-secties. De secties zijn gefixeerd met 1% glycerine, waardoor ze volledig kunnen drogen. Het wordt vervolgens in xylol geplaatst om de paraffine te verwijderen.
Het gedeelte wordt gerehydrateerd door het gedurende 2 minuten in elk bakje door een reeks bakken met ethanol in verschillende concentratiegraden (aflopende volgorde) te leiden..
Vervolgens wordt het 5 minuten gekleurd met een 3: 1-mengsel van 1% safranine met 1% toluïdineblauw, beide bereid met 50% ethanol. Aan het mengsel worden drie druppels picrinezuur toegevoegd, dat als bijtmiddel werkt..
Daarna wordt het uitgedroogd door weer door de alcoholdrays te gaan, maar dit keer in stijgende lijn. Ten slotte wordt het gespoeld met xylol en wordt het monster bereid met Canada balsem om te observeren..
Gelukkig is safranine een kleurstof die geen gevaar vormt voor degenen die ermee omgaan. Het is een onschadelijke kleurstof, het is niet kankerverwekkend en het is niet brandbaar..
Direct contact met de huid of slijmvliezen kan een lichte roodheid in het gebied veroorzaken, zonder grote complicaties. Hiervoor wordt aanbevolen om het getroffen gebied met veel water te wassen.
Niemand heeft nog op dit artikel gereageerd.